乙肝五项操作规程

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1、乙肝五项（乳胶法）操作规程1.检测目的乙型肝炎病毒标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)检测。2.测定原理HBsAg检测采用双抗体夹心法原理，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T区）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒（即标记物）结合的HBsAb（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析过程中先与标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAb捕获，形成HBsAb标记抗体-HBsAg-

2、HBsAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。HBsAb检测采用双抗原夹心法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBsAg。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBsAg反应（即标记抗原）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗原（标记抗原）在层析过程中先与标本中的HBsAb结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAg捕获，形成HBsAg标记抗原-HBsAb-HBsAg复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。HB

3、eAg检测采用双抗体夹心法原理。试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBeAb。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBeAb反应（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析过程中先与标本中的HBeAg结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBeAb捕获，形成HBeAb标记抗原-HBeAg-HBeAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。HBeAg、HBcAb采用竞争抑制法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（T区

4、）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体，则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争，与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，则预包被在乳胶颗粒上的相应抗原与膜上测试区(T)的单克隆抗体全部结合。阳性标本，测试区(T)将没有红色条带；阴性标本，测试区(T)会出现明显的红色条带。3.标本采集样本采集后应尽快分离血清或血浆以避免溶血。检测进应尽量使用新鲜的样本。样本若不能及时送检，可在2-8℃冷藏3天。长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融

5、。发臭、溶血等异常样本请勿使用。4.试剂艾博生物医药有限公司5.操作步骤5.1使用前将试剂板和血清／血浆标本恢复至室温(20～30％)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温)，在1小时内应尽快地使用。5.2将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清／血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的五个加样子L中(每孔2-3滴)。5.3加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。在20分钟后读取的结果无效。6.结果判定由于前三个项目HBsAg、HBsAb、HBeAg使

6、用双抗体(原)夹心法原理，后两个项日HBeAb、HbcAb使用竞争法原理。因此前一：个项日与后两个项目判读方法是不同的，请注意区别。6.l.HBsAg、HBsAb、HbeAg6.1.1阳性(+)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。6.1.2阴性(-)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。6.1.3无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。

7、在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。6.1.4注意：在进行HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应该判为阳性结果。6.2.HBeAb、HBcAb6.2.1阳性(+)：仅质控区(C)出现一条红色条带．在测试区(T)内无红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。6.2.2弱阳性(+)：质控区(C

8、)出现一条红色条带，在测试区(T)内有非常弱的红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。6.2.3阴性(-)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。6.2.4无效：质控区(C)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。7.质量控制7.1请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定无效