《器官培养》PPT课件

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1、器官培养主要指植物根、茎、叶、花及小果实的无菌培养。器官培养的特点在于能保持它们所具有的特征性结构，通过器官培养可快速大量地繁殖。目前这一技术已在生产上得到广泛应用。本章将介绍离体根的培养、茎的培养和叶的培养。第七章器官培养第一节根的培养离体根的培养，由于具有生长迅速、代谢活跃及在已知条件下可根据需要增减培养基中的成分等优点，多用于探索植物根系的生理及其代谢活动。一、培养过程现以番茄根为例，介绍其培养过程（图6-1）。番茄种子经表面消毒，在无菌条件下萌发，待根伸长后，从根尖一端切取10mm长的根尖接种于培养基中。图7-

2、1番茄离体根培养的过程1、种子用70%酒精消毒1分钟；2、用饱和漂白粉液消毒10分钟；3、用无菌水洗三次；4、将6～10粒种子放入培养皿中的湿滤纸上；5.培养皿放入暗中培养直至胚根长至30～40mm；6.切取10mm长的根尖用无菌的接种环接种于培养液中；7.在25℃下培养直到长出侧根暗培养4天后长出侧根，7天后又可切离侧根的根尖作为新的培养材料再进行扩大培养。通过这种由单个直根衍生而来，并经继代培养而保持遗传性一致的根的培养物，可称为离体根的无性系。二、培养基目前培养番茄离体根时，使用改良的怀特培养基（表6-1）。培养

3、基中氮源以硝酸盐的效果好，蔗糖是双子叶植物离体根培养最好的碳源。与怀特培养基相比，降低了大量元素的浓度，但甘氨酸和烟酸的用量增加，硫胺素（维生素B6）对离体根培养的作用明显，所用浓度仍为0.1mg/L。在这个培养基中增加了碘的成分，因为碘有利于番茄根的生长，浓度为0.38mg/L。硼对离体根的生长也具有重要的影响，缺硼会降低根尖细胞的分裂速度，阻碍细胞伸长等。对离体根培养研究得最多的是胡萝卜，用White培养基添加0.01mg/L的2,4－D和0.15mg/L的KT使胡萝卜肉质根形成愈伤组织。将未分化的愈伤组织球形细胞

4、转入到含低水平生长素的培养基中，细胞先形成根，再产生不定芽，长成小植株。用胡杨的根段进行离体培养，在根段的上面先形成愈伤组织，后再分化产生出小植株。生长调节物质对离体根生长的影响，因植物种或品种的不同而存在差别。如离体根对生长素的反应有三种情况：1.生长素促进根的生长（如玉米、小麦等）；2.有些植物离体根的生长要依赖于生长素的作用（如黑麦、小麦的一些变种）；3.生长素抑制植物离体根的生长（如樱桃、番茄等）。第二节茎的培养根据取材部位茎的培养可分为茎尖培养和茎段培养。关于茎尖培养详见第八章，这里只讨论茎段的培养。一、

5、茎段培养过程茎段培养是指带有腋（侧）芽或叶柄、长数厘米的茎节段进行离体培养。由于嫩茎段（即当年萌发或新抽出的尚未完全木质化的枝条），其细胞的可塑性大，容易离体培养，常作为外植体。一般在无菌条件下，将经过消毒的茎段切成数厘米长带节的节段，接种在固体培养基上。茎段可直接形成不定芽或先诱导形成愈伤组织，再脱分化形成再生苗。把再生苗进行切割，转接到生根培养基上培养，便可得到完整的小植株。现以月季为例说明。（一）培养基诱导萌芽培养基MS+BA0.5-1.0mg/L；增殖培养基MS+BA1.0-2.0mg/L+NAA0.01-

6、0.1mg/L或MS+BA1.0-2.0mg/L+IAA0.1-0.3mg/L；生根培养基1/2MS+NAA0.1-0.2mg/L+IAA1.0mg/L或1/2MS+IBA0.75mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖2%。（二）培养过程1.取材生长健壮的当年生枝条，取其饱满的未萌芽的作为外植体。一般取中部的侧芽诱导效果最好。2.灭菌切去叶片及叶柄，切成1～2cm的带节茎段（如果是嫩梢需切去少许芽的顶部）。将原来向下的茎端切成斜面，向上的茎端切成平面（这是为了以后接种时方便，也为了避免接种时将上下颠倒）。将清理好的材料在

7、自来水下冲洗干净，然后在无菌条件下用70%酒精表面消毒30s，用无菌水洗3～4次，用0.1%的升汞溶液灭菌8～12min(或用2%漂白粉溶液灭菌8～12min),取出后在无菌水中清洗4～5次（用漂白粉溶液灭菌的清洗3～4次）。3.接种、生长及分化在无菌条件下操作，将茎段两端用解剖刀切去少许(以除去被杀菌剂伤害的组织)，接种在诱导培养基上，7d后芽开始萌发，茎尖展叶生长，20d后长至1～2cm；4.继代培养萌生芽会不断长大，并可从茎段上分化出若干个丛生芽，这时可通过侧芽增殖和丛生芽再生的方式进行继代增殖，切割出丛生芽或将

8、幼芽分切成每段含1～2个节的茎段，转入增殖培养基中，每隔4周继代一次。对于增殖率过高的品种，小苗会变得非常细弱，一般需要转入MS+BA0.3MG/l+NAA0.1mg/L(或IBA0.3mg/L)的低分裂素培养基中进行壮苗培养，再转入生根培养基中。5.生根培养将继代增殖的丛生苗切成长度为2～3cm的单株，转入生根培养基中，12d后