乙肝血清免疫标志物及HBV

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1、乙肝血清免疫标志物及HBV-DNA监测结果相关性分析及临床应用陕西省宝鸡市中心医院感染科王凤岚【摘要】目的分析了解乙肝血清免疫标志物的各种表达模式与乙肝病毒含量的相关性，为临床诊断、治疗提供依据。方法应用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测乙型肝炎免疫标志物，同时应用实时荧光定量聚合酶链反(FQ-PCR)技术定量监测乙型肝炎病毒(HBV-DNA)。所有检测标本乙肝血清免疫标志物和乙肝病毒含量同时检测。结果乙肝血清免疫抗原标志物乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg）阳性、乙型肝炎病毒e抗原（HbeAg）阳性其HBV-DNA均为阳性，且含量较高；乙肝血清免疫标志物

2、大三阳[乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg）阳性、乙型肝炎病毒e抗原（HbeAg）阳性、乙型肝炎病毒核心抗体(HbcAb)阳性]模式中其HBV-DNA阳性率为94.61%；乙肝血清免疫标志物小三阳[HbsAg阳性、HbeAb阳性、HbcAb阳性]模式中其HBV-DNA阳性率为39.26%；乙肝血清免疫抗体标志物HbsAb阳性、HbcAb阳性模式中HBV-DNA阳性率显著减少。结论：在乙肝检测中应联合应用两种方法进行检测，提高检出率，避免漏诊，为临床HBV感染、复制及传染性的判断以及疗效分析提供更为可靠的判断依据。【关键词】荧光定量PCR HBV-DNA时间分辨(

3、TRFIA)乙肝血清免疫标志物[乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg），乙型肝炎病毒表面抗体（HbsAb），乙型肝炎病毒e抗原（HbeAg），乙型肝炎病毒e抗体（HbeAb），乙型肝炎病毒核心抗体(HbcAb)，简称两对半]测定与HBV-DNA监测是目前乙型肝炎临床早期诊断和疗效评估主要手段，其中乙肝两对半指标是反映机体感染后免疫状态的间接指标【1-2】，HBV-DNA则可准确反映机体感染乙肝病毒的现状，因为PCR能定量检测乙肝病毒核酸，是病毒是否存在、是否复制及其数量多少的最直接指标【3】。两种方法测定结果的相关性分析有助于为临床制定科学的乙肝防治方案【4】。作

4、为感染性疾病科的专科实验室，我们自2004年引定了时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术和实时荧光定量(FQ-PCR)技术，多年来通过大量监测数据及相关性资料分析，为临床制订对不同感染阶段患者实施不同抗病毒或被动免疫方案提供了帮助，现总结如下。1资料与方法1．1资料来源2010年7月～12月本院感染性疾病科住院病人及门诊就诊者719例，每位被检测者同时进行乙肝两对半和HBV-DNA检测。1．2仪器试剂：1．2．1时间分辨荧光免疫分析仪 型号：DR-6608、乙肝血清免疫标志物定量检测试剂盒（4中山达安）。标准曲线拟合方式：FITTING,METHOD，最低检出

5、量：0.5ng/ml。1．2．2实时荧光定量扩增仪型号：DA-7600、乙型肝炎病毒定量检测试剂（中山达安）。PCR-荧光探针法，线性范围：1.0×103-109IU/ml。最低检出量：1.0×103IU/ml。1．3检测方法1．3．1 TRFIA检测乙肝血清免疫指标物（两对半）：静脉采血2-3ml，4℃放置2小时后分离血清备用（标本长期保存需将标本置于-20℃以下）；铕标记抗原（抗体）实验前1小时用去离子水溶解、缓冲液稀释；经加样、洗剂、增强、荧光检测等依据标准曲线定量。记录乙肝血清免疫标志物模式。1．3．2FQ-PCR技术监测HBV-DNA含量：静脉采血2

6、-3ml，室温放0.5-1小时后分离血清于无菌离心管中备用（标本长期保存需将标本置于-20℃以下）。经DNA提取、PCR扩增、依据标准曲线定量检测HBV-DNA含量。1．4统计学处理应用SPSS16.0统计软件包进行资料录入、整理及处理。计数资料行X检验。检验水准a=0.05。2结果3例乙肝血清免疫标志物HbsAg阳性、HbeAg阳性其HBV-DNA均为阳性，含量分别为2.32×106IU/ml；4.96×107IU/ml；；1.96×108IU/ml。204例乙肝血清免疫标志物大三阳（HbsAg阳性HbeAg阳性HbcAb阳性）模式中其HBV-DNA阳性率为

7、94.61%(193/204)。405例乙肝血清免疫标志物小三阳（HbsAg阳性HbeAb阳性HbcAb阳性）模式中其HBV-DNA阳性率为39.26%(159/405)。经统计学处理大三阳组和HBsAg阳性HBcAb阳性组与小三阳组差异显著（X【2】=170.38，p<0.05）。37例乙肝血清免疫标志物（HbsAg阳性HbcAb阳性）模式中其HBV-DNA阳性率为70.27%（26/37）。乙肝血清免疫标志物全阴性模式中检出1例HBV-DNA阳性。乙肝血清免疫标志物HbsAb阳性、HbcAb阳性模式中HBV-DNA阳性率显著减少。具体结果见表1-2。表1乙

8、肝血清免疫标志物（两对半）各种模式统计