常用染料的激发与发射

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1、常用荧光染料的激发和发射波长FluorescentDye（荧光染料）Excitation（激发波长，nm）Emission（发射波长，nm）Cy2™489506GFP(RedShifted)488507YO-PRO™-1491509YOYO™-1491509Calcein494517FITC494518FluorX494519Alexa™488490520Rhodamine110496520ABI,5-FAM494522OregonGreen™500503522OregonGreen™488496524RlboGreen™500525RhodamineGreen™

2、502527Rhodamine123507529MagnesiumGreen™506531CalciumGreen™506533TO-PRO™-1514533TOTO-1514533ABI,JOE520548BODIPY™530/550530550Dil549565BODIPY™R542568BODIPY?558/568558568BODIPY?564/570564570Cy3™550570Alexa™546555570TRITC547572MagnesiumOrange™550575Phycoerythrin,R&B565575RhodaminePhalloid

3、in550575CalciumOrange™549576PyroninY555580RhodamineB555580ABI,TAMRA560582RhodamineRed™570590Cy3.5™581596ABI,ROX588608CalciumCrimson™590615Alexa™594590615TexasRed595615NileRed549628YO-PRO™-3612631YOYO™-3612631R-Phycocyanin618642C-Phycocyanin620648TO-PRO™-3642660TOTO-3642660DiDDilC’(5)6

4、44665Cy5™649670Thiadicarbocyanine651671Cy5.5675694备注：发射波长的颜色及频率 颜色波长频率红色约625—740纳米约480—405兆赫橙色约590—625纳米约510—480兆赫黄色约565—570纳米约530—510兆赫绿色约500—565纳米约600—530兆赫青色约485—500纳米约620—600兆赫蓝色约440—485纳米约680—620兆赫紫色约380—440纳米约790—680兆赫   荧光染料的使用 吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，D

5、NA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。EB:染色DNA和RNA荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD 本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取0.22mlFDA贮存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中.使用时,使最终浓度为0.01%。荧光染料Ho33342和若丹明123: 活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后

6、改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。 荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。3．在荧光观察中，常因激发

7、光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。