致病菌检验方法cly)

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1、致病菌检测方法福建省疾病预防控制中心陈路瑶需要检测的致病菌乙型溶血链球菌大肠杆菌绿脓杆菌金黄色葡萄球菌志贺氏菌沙门氏菌溶血性链球菌检测依据：GB/T4789.11-2003食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验检验程序检样葡萄糖肉汤血平板血平板（分纯培养）链激酶试验杆菌肽敏感试验观察溶血革兰氏染色报告36℃±1℃24h36℃±1℃36℃±1℃24h24h1、菌落特征：溶血性链球菌菌落特征：灰白色细小针尖样。菌落周围形成一个2-4mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环。2、革兰氏染色：乙型溶血性链球菌为革兰氏阳性球菌，在镜下呈现为蓝紫色，圆形，链状排列。3、杆菌肽敏感试验乙型溶血性链球菌对杆菌肽敏

2、感，在涂布了该菌菌液的血平板上贴上杆菌肽，36℃培养18~24h，如果有大于10mm的抑菌带出现即为阳性。4、链激酶试验乙型溶血性链球菌能产生链激酶，能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，凝固形成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。试验中，能使凝固的血浆完全溶解为溶解链激酶试验阳性。大肠杆菌依据：GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准附录B3大肠菌群检测方法1、发酵试验取样液5ml接种50ml乳糖胆盐发酵管，置37℃培养24h，如不产酸不产气，则报告为阴性，如产酸产气，则进行下一步试验。2、接种平板乳糖胆盐发酵试验阳性的管，划线接种伊红美蓝平板。典型的大肠杆菌菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边

3、缘整齐，表面光滑湿润，有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。3、革兰氏染色取疑似菌落作革兰氏染色镜检，大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，镜下呈红色杆状。5、复发酵伊红美蓝平板上的疑似菌落在染色镜检的同时接种乳糖发酵管，如有产酸产气，则可报告检出大肠杆菌。绿脓杆菌依据：GB7918.4-87化妆品微生物标准检验方法绿脓杆菌检验程序：增菌培养分离培养染色镜检氧化酶试验绿脓菌素试验硝酸盐还原产气试验明胶液化试验42℃生长试验报告37℃培养18~24h37℃培养18~24h1、增菌培养如有绿脓杆菌生长，培养表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色2、分离培养绿脓杆菌菌落

4、扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性色素。3、染色镜检取疑似菌落作革兰氏染色镜检，绿脓杆菌为革兰氏阴性杆菌，镜下呈红色短杆状。4、氧化酶试验挑取绿脓杆菌可疑菌落涂在白色滤纸上，加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，在15~30s内，出现粉红色或紫红色，为阳性，无色或淡黄色为阴性。5、绿脓菌素试验取可疑菌落接种绿脓菌素鉴定用培养基，37℃培养24h,加入氯仿3~5mL，充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液中，等氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管内并加入1mol/L的盐酸1mL，振荡，静置片刻，如上层盐酸内出现粉红到紫红色时，为阳性，

5、表示有绿脓菌素存在。6、硝酸盐还原产气试验接种被检纯培养物于硝酸盐胨水培养基中，37℃培养24h。小倒管中有气体者，为阳性，表明该菌能还原硝酸盐，产生氮气。7、明胶液化试验将可疑菌落穿刺接种在明胶培养基内，37℃培养24h,取出放冰箱10~30min，如何呈溶解状态，即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者为阴性。8、42℃生长试验挑取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，放在41℃~42℃培养箱中24h~48h，绿脓菌能生长，为阳性。不能生长为阴性。金黄色葡萄球菌依据：GB7918.5-87化妆品微生物标准检验方法金黄色葡萄球菌检验程序增菌分离染色镜检甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验报告37℃18~2

6、4h37℃24~48h1、增菌：取样液按1：10比例接种到SCDLP液体培养基中，或者可用7.5%氯化钠肉汤，置37℃培养箱，培养24h。2、分离将增菌培养液划线接种于血琼脂平板置37℃培养24~48h，菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。3、染色镜检挑取可疑菌落涂片染色镜检，该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄状，蓝紫色。4、甘露醇发酵试验取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置37℃培养箱，培养24h。金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。5、血浆凝固酶试验玻片法：取清洁干燥载玻片上，一端加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取菌落，分别在生盐及血浆中充分研

7、磨混合。血浆与菌在5min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象都为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验阴性或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。5、血浆凝固酶试验试管法：吸取1：4新鲜血浆0.5ml，加入待检菌24h肉汤培养物0.5ml。混匀，于37℃水浴或恒温箱中，半小时观察一次，24h内呈现凝块为阳性。5、血浆凝固酶试验乳胶凝集法金黄色葡萄球菌鉴定试剂