致病菌检验-蜡样芽孢杆菌..ppt

《致病菌检验-蜡样芽孢杆菌..ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、蜡样芽胞杆菌致病菌检验蜡样芽胞杆菌（一）生物学特性1、形态与染色革兰氏阳性大杆菌，宽度在1μm或1μm以上，芽孢呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。需氧，最适生长温度30~32℃。在肉汤中混浊生长，有菌膜或壁环，振摇易乳化。在普通琼脂平板上，菌落灰白色，不透明，边缘不整齐，表面粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状。在血平板上，菌落呈浅灰色，不透明，似白色毛玻璃状，有溶血环。在甘露醇卵黄多粘菌素平板上，菌落呈粉红色，具有白色混浊环（不发酵甘露醇、产生卵磷脂酶）2、培养特性能分解葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，水杨苷，产酸不产气。不分解乳糖，甘露醇，阿拉伯糖，山梨醇，木糖H2S（-），尿素酶试验（

2、-）卵磷脂酶（+），V-P试验（+），液化明胶。3、生化反应食品蜡样芽胞杆菌数量>106/g（mL）时常可导致食物中毒，导致中毒的主要原因是其产生的肠毒素。肠毒素类型：耐热性肠毒素：100℃30min不能被破坏，常在米饭中形成。不耐热肠毒素：能在各种食物中形成。临床症状：食物中毒，分为呕吐型和腹泻型两类。二、致病性三、检验方法1、检验标准；GB4789.14—20032、培养基和试剂培养基:肉浸液肉汤培养基酪蛋白琼脂培养基动力-硝酸盐培养基缓冲葡萄糖蛋白胨水血琼脂培养基木糖-明胶培养基甘露醇卵黄多粘菌素(MYP)琼脂培养基、试剂：0.5%碱性复红染色液、革兰氏染色液、3%过氧化氢溶液、

3、甲萘胺-乙酸溶液、对氨基苯磺酸-乙酸溶液。3、检验程序36℃±1℃12h~20h37℃，18h~24h36℃±1℃12h~20h检样25g（mL）加225mL生理盐水菌数计算做成10-1~10-5的稀释液选择性培养基（分离培养）MYP营养琼脂培养基生长及菌落观察染色镜检生化试验菌株保存报告选择性培养基（菌数测定）MYP包括四个步骤：①菌数测定:涂布甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）平板计数。②分离培养:从MYP上挑可疑菌落进行纯培养。③证实实验:包括形态观察、培养特性、生化性状和生化分型试验。④与类似菌的鉴别：主要是与苏云金芽孢杆菌的鉴别。⑤结果报告：报告每g（mL）检样中所含的蜡样芽孢杆菌

4、数。将样品稀释液0.1mL涂布于甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂平板上培养后，选取适当菌落数的平板进行计数。计数后，从中挑取5个典型菌落做证实试验。根据证实的蜡样芽孢杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数。蜡样芽孢杆菌数=可疑菌落数×证实为阳性菌落数的比例×稀释倍数×10菌数测定：MYP培养基中含有卵黄、甘露醇、多粘菌素和pH指示剂酚红等。多粘菌素可抑制杂菌的生长。蜡样芽孢杆菌不发酵甘露醇，菌落为粉红色（否则为黄色）。该菌产生卵磷脂酶，由于脂肪和卵磷脂被分解，在菌落周围产生粉红色的晕。分离培养和证实试验:分离培养：从MYP平板上挑可疑菌落到营养琼脂上进行纯培养。证实试验：（1）形态观察（2

5、）培养特性（3）生化性状及生化分型①生化性状本菌有动力；能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧化氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖；常能液化明胶和使硝酸盐还原；在厌氧条件下能发酵葡萄糖。②生化分型根据蜡样芽孢杆菌对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，分成不同的型别。型别生化试验柠檬酸盐利用硝酸盐还原淀粉水解V-P反应明胶液化123456789101112131415＋－＋－－＋＋－－－＋＋－＋＋＋＋＋－－－－＋＋＋＋＋－－－＋＋－＋－－＋－－＋＋－＋－＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－－－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－＋＋表1蜡样芽孢杆菌生化分型表2蜡样芽孢杆菌与

6、其他类似菌的鉴别项目巨大芽孢杆菌蜡样芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌蕈状芽孢杆菌炭疽芽孢杆菌过氧化氢酶动力硝酸盐还原酪蛋白分解卵黄反应葡萄糖利用（厌氧）甘露醇木糖溶血已知致病菌特性＋＋/－－＋/－－－＋＋/－－＋＋/－＋＋＋＋－－＋产生肠毒素＋＋/－＋＋/－＋＋－－＋对昆虫致病的内毒素结晶＋－＋＋/－＋＋－－－/＋假根样生长＋－＋－/＋＋＋－－－/＋对动物和人致病注：＋90%~100%的菌株阳性；－90%~100%的菌株阴性；＋/－大多数菌株阳性；－/＋大多数菌株阴性。与类似菌鉴别：★鉴别：蜡样芽孢杆菌在形态以及生化性状上与苏云金芽孢杆菌极为相似，要进行鉴别。主要是通过观察伴孢晶体来判断，苏云金

7、芽孢杆菌有伴孢晶体，蜡样芽孢杆菌无。苏云金芽孢杆菌及其伴孢晶体蜡样芽孢杆菌