食品微生物学检验致病菌的检验课件.ppt

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1、食品微生物学检验致病菌的检验食品药品检验所食品微生物学检验致病菌的检验食品安全国家标准GB4789.1-2010食品微生物学检验总则GB4789.2-2010食品微生物学检验菌落总数测定GB4789.3-2010食品微生物学检验大肠菌群计数GB4789.4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.5-2012食品微生物学检验志贺氏菌检验GB/T4789.7-2008食品微生物学检验副溶血性弧菌检验GB4789.10-2010食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB/T4789.11-2003食品微生物学检验溶血性链球菌检验GB4789.15-2010食品微

2、生物学检验霉菌和酵母计数GB4789.18-2010食品微生物学检验乳与乳制品检验GB4789.30-2010食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验GB4789.35-2010食品微生物学检验乳酸菌检验GB/T4789.36-2008食品微生物学检验大肠埃希菌O157：H7/NM检验GB4789.40-2010食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验食品安全国家标准实验室环境应不影响检测结果的准确性。实验室的工作区域应与办公室区域明显分开。实验室工作区域面积和总体布局应能满足从事检测工作需求，实验室布局应采用单方向工作流程，避免交叉污染。实验室内温度、湿度、照度、噪声和

3、洁净度等应符合工作要求。环境：食品安全国家标准一般样品检测应在洁净区域(包括超净工作台或洁净实验室)进行，洁净区域的应有明显标示。病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安全实验室(Biosafetylevel2BSL-2)进行(超净工作台不能替代生物安全柜)。环境：食品安全国家标准BSL－2实验室食品安全国家标准参考菌株可以从国际菌种保藏中心如ATCC、国内具资质菌种保藏中心或室间质控活动中获得，准确鉴定过的分离株也可使用。实验室要准备好足够种类和数量的参考菌株，满足培养基、试剂盒和试剂质量测试的需要。菌种：食品安全国家标准食品安全国家标准食品安全国家标准食品安全国家

4、标准微生物常规检验技术平板划线分离：微生物常规检验技术形态结构观察：染色特性形状大小排列方式细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）微生物常规检验技术革兰氏染色：1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立。革兰染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。微生物常规检验技术革兰氏染色：G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经石炭酸复红复染后就成红色

5、。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。微生物常规检验技术革兰氏染色：微生物常规检验技术革兰氏染色：微生物常规检验技术细菌的运动性观察：微生物常规检验技术细菌的运动性观察：微生物常规检验技术设计生化实验的原则：在实验中加入某些化学物质，使细菌代谢途径中分解代谢产物与加入的化学物质发生反应，产生某些变化或出现某种特征。微生物常规检验技术过氧化氢酶及过氧化物酶实验原理：2H2O2过氧化氢酶2H2O+O2过氧化物酶：RH2+H2O2过氧化物酶R+2H2O阳性：细菌变为黑褐色，有气

6、泡产生；阴性：不变色。阳性阳性阴性微生物常规检验技术细胞色素氧化酶实验原理：细胞色素C细胞色素氧化酶氧化型细胞色素C+对苯二胺+--奈酚靛酚兰（蓝色）阳性：2分钟内生成蓝色为阳性；阴性：无变化。阳性阴性微生物常规检验技术氰化钾实验：阳性：不抑菌，变混浊阴性：抑菌微生物常规检验技术硝酸盐还原实验原理：KNO3还原酶KNO2KNO2+对氨基苯磺酸+-萘胺（立刻或数分钟内）红色化合物阳性阴性微生物常规检验技术糖发酵实验：分解糖产酸，PH值下降，使培养基的酸碱指示剂发生变化。阳性：产酸产气阴性阳性微生物常规检验技术氧化发酵实验（O/F实验）：有些微生物分解葡萄糖必须有

7、氧参加，此种细菌称为氧化型；有些细菌有氧无氧均可分解葡萄糖，称发酵型；有些细菌任何条件都不能分解葡萄糖，称产碱型。阴性灭菌琼脂（厌氧）微生物常规检验技术甲基红实验（MR实验）原理：一些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可被进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸而使培养基的pH值下降到4.5以下，加入甲基红指示剂出现红色反应。微生物常规检验技术V-P实验原理：一些细菌分解葡萄糖为丙酮酸，进一步脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化成二乙酰丁二酮，进而与培养基内蛋白胨中所含的精氨酸的胍基发生反应生成红色化合物。阴性阳性微生物常规检验技术柠檬酸盐实验

8、（枸橼酸盐