《CR质量管理》PPT课件

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1、临床基因扩增实验室质量保证西安友谊医学检验所王洋核酸实验室工作要求及流程1、设施与环境：由于基因扩增检验对靶核酸有一个指数扩增过程,因而有大量的扩增产物的出现，这种产物极易对以后新的扩增反应产生“污染”，为防止这种污染的发生，就需要对实验室进行严格分区。2、人员：必须经过培训并取得上岗证。3、设备、标本、耗材、记录的管理www.youyijianyan.com四个方面阐述一、测定前的标本采集处理二、测定中的核酸提取三、扩增和产物分析四、测定后的结果报告www.youyijianyan.com测定前的标本采集标本的采

2、集临床PCR实验室对各种临床标本的收集都建立了标准操体程序（SOP）。标本的采集、运送和保存对检验结果往往有决定性的影响，因此，为保证得到高质量的检验结果，必须有一个规范的临床标本采集、运送和保存的程序。www.youyijianyan.com测定前的标本采集常用于基因扩增检测的临床标本包括：1、EDTA或枸椽酸钠抗凝全血或骨髓2、血清或血浆3、尿液、乳汁、组织4、咽拭子、生殖道拭子及分泌物等。测定前的标本采集二、影响标本采集的因素1、标本采集的时间2、标本采集部位3、标本采集的类型和采集量4、采样质量的评价5、采

3、样及运输容器6、标本采集中的防污染测定前的标本采集采集时间标本采集过早或过晚都可能会给出假阴性结果。当病原体感染机体后，特定的临床标本中，病原体含量能达到PCR检出水平的点，并不能覆盖整个感染过程，可能只是在感染或疾病发生发展过程中的某一个时间段。如：呼吸道冠状病毒，感染发病后3-4d，即可出现于上或下呼吸道标本中，在10-13天，在尿液和粪便中出现的浓度最高，而在血液中，则不但存在时间短，而且浓度低。又如：HBV、HCV和HIV感染等，机体感染后，在特定抗原和抗体出现以前，血循环中即可有较高的病原体存在，而当抗体

4、出现后，病原体的浓度在不同的患者不同的感染阶段有可能是不一样的，有的可能会低于特定PCR方法的测定下限。测定前的标本采集标本采集部位、类型和采集量1、在临床静脉血液标本的采集上，一般不会出现对结果影响很大的情况。但在泌尿生殖道分泌物及咽拭子标本的采集上，如果采集不当，可能有相当一部分结果出现假阴性。2、类型与采集量应根据所测病原体而定。3、标本量的大小对测定非常重要。标本量大会使外源非相关DNA增多，有可能会影响测定的敏感性。测定前的标本采集采样及运输容器标本的采集材料如棉签、拭子等均为一次性使用，运输容器应为密闭

5、的一次性无菌装置，采样所用的防腐剂及相关试剂材料不应对核酸扩增及检测过程造成干扰。如：PCR不能使用肝素抗凝，因为肝素是Taq酶的强抑制剂，而且在其后的核酸提取步骤中很难去除，故应尽量避免使用。测定前的标本采集采样质量的评价⑴、血清（浆）标本可观察标本是否溶血、脂血及其程度；（血红素及其代谢产物、脂类等对PCR有抑制作用）⑵、分泌物标本，则可从细胞组成，所需类型细胞的数量等方面进行评价。如：分泌物标本，则可以镜下观察是否有上皮细胞存在；痰标本如果白细胞数量极少，则并没有采集到真正的痰测定前的标本采集标本采集中的防污

6、染1、最好采用一次性无菌及无核酸酶的材料，不用处理便可直接使用，采集中要特别注意防止混入操作者的头发、表皮细胞、痰液等。2、如使用玻璃器皿，必须经0.1%DEPC水处理后高压。以使可能存在的RNase失活。总而言之，标本的收集及适当的预处理，对于用于PCR测定的核酸模板的成功提取，具有决定性作用。测定前的标本采集三、标本运送与保存：标本一经采集，则应尽可能快的送至检测实验室。⑴、DNA的标本，如是在无菌条件下采集，则可以在室温下运送，建议采集后，在8h之内送实验室；（不能及时送实验室之前，均应暂放在2-8℃临时保存

7、）⑵、RNA的标本，短时间内的运送如10min左右，则可室温下运送，如为较长时间，则应在加冰条件下运送。（血标本必须在抽血后2小时分离血清，以免RNA的降解。最理想是存放在-70℃）标本的接收1、核对检验单的一般信息：姓名、性别等2、按检测项目验证标本类型：例：CMV：EDTA抗凝血、尿液、母乳或咽拭子；3、标本状态检查；4、标本唯一性标识的确认：例：090909B01表示HBV-DNA在2009年9月9日的第1号标本。标本的拒收1、标本的拒收条件：⑴标本血量不足（全血＜2ml），⑵标本管破裂、姓名等与申请单不相符

8、，⑶使用肝素抗凝的标本，⑷标本采集后送检时间超过2小时、且未低温保存者2、拒收程序填写相关的记录表、告之相关科室、人员重采标本常见标本的处理与保存一、血清（浆）标本1、HBV-DNA样本处理与保存：可按照一般的血清标本处理程序，对测定影响不大。2、HCV-RNA样本处理与保存：血清标本则需尽快（2h内）分离血清，EDTA抗凝的全血标本在6h内分离血浆，血清（