细胞工程复习复习

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1、细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。细胞工程应用的原理和方法研究的水平研究的目的细胞生物学和分子生物学细胞整体水平或细胞器水平按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品概念分类动物细胞工程植物细胞工程所采用技术的理论基础植物细胞工程通常采用的技术手段植物组织培养植物体细胞杂交植物细胞的全能性植物组织培养在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上给予适宜的培养条件，

2、诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。切取形成层无菌接种诱导愈伤组织的形成试管苗的形成完整植株移栽大田脱分化再分化以胡萝卜的组织培养为例，概括出植物组织培养技术的流程简图。聚焦一、植物组织培养技术脱分化:愈伤组织:让已经分化的细胞,经过诱导后,失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程.由一团排列疏松而无规则,高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞组成.再分化:脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做再分化.外植体愈伤组织根、芽新个体脱分化植物激素：细胞分裂素、生长素再分化植物组织

3、培养条件：含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。聚焦一、植物组织培养技术1、概念将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。聚焦二、植物体细胞杂交技术植物A细胞植物B细胞去壁原生质体A原生质体B原生质体融合融合细胞再生壁杂种细胞脱分化去壁的常用方法：酶解法（纤维素酶、果胶酶等）原生质体融合方法：物理法：离心、振动、电刺激等化学法：聚乙二醇（PEG）融合成功的标志人工诱导筛选愈伤组织杂种植株再分化2、植物体细胞杂交的过程3、优势和未解决的问题优势

4、（与有性杂交方法比较）：打破了不同种生物间的生殖隔离限制，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。未解决的问题：未能让杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良。聚焦三、植物体细胞杂交技术2.1.2植物细胞工程的实际应用植物繁殖的新途径微型繁殖作物脱毒人工种子育种新方法单倍体育种突变体的利用细胞产物的工厂化生产专题2细胞工程2.2动物细胞工程（一）、概念是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。（二）、原理细胞分裂增殖一、动物细胞培养动物细胞培养胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬浮

5、液10代细胞50细胞无限传代剪碎胰蛋白酶洗涤、稀释、分离原代培养动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。传代培养细胞株细胞系动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。接触抑制细胞贴壁生长动物细胞培养条件1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等）3、温度和PH温度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、气体环境O2和CO2（95%空气和5%CO2）获得细胞细

6、胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较二.动物细胞核移植技术和克隆动物将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）动物细胞核移植概念：MⅡ卵母细胞去核培养的体细胞重组细胞重组胚胎新个体动物体细胞核移植技术和克隆动物电刺激促融合、分裂、发育细胞A细胞B杂种

7、细胞物理法、化学法灭活的病毒三、动物细胞融合过程诱导动物细胞融合与植物原生质体融合的原理和方法是否基本相同？思考？制备单克隆抗体不具有繁殖性但具有融合性主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）生物：灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（PEG）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较抗原动物体内刺激效应B抗体特点：产量低、特异性差、纯度低、反应不够灵敏

8、四、单克隆抗体1、常规抗体制备：一个B淋巴细胞：只分泌一种特异性抗体2、单克隆抗体杂交瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞：能无限增殖融合单克隆抗体培养抗原注入小鼠体内已免疫的B淋巴细胞骨髓瘤细胞筛选出杂交瘤细胞筛选出能产生特异性抗体的细胞群体外培养体内培养从培养液中提取从小鼠腹水中提取单克隆抗体细胞融合