细胞工程复习纲要

《细胞工程复习纲要》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、1．阐述生物技术的各研究领域。基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质工程基因工程是指在微观领域（分子水平）中，根据分子生物学和遗传学原理，设计并实施一项把一个生物体中有用的目的DNA(遗传信息)转入另一个生物体中，使后者获得新的需要的遗传性状或表达所需要的产物，最终实现该技术的商业价值。蛋白质工程蛋白质工程就是在对蛋白质的化学、晶体学、动力学等结构与功能认识的基础上，对蛋白质人工改造与合成，最终获得商业化的产品。“后基因组时代”将是“蛋白质组学时代”，即从对基因信息的研究转向对蛋白质信息的研究，包括研究蛋白质结构

2、、功能与应用及蛋白质相互关系和作用。发酵工程现代发酵工程主要指利用微生物、包括利用DNA重组技术改造的微生物在全自动发酵罐或生物反应器中生产某种商品的技术。现代发酵工程是生物代谢、微生物生长动力学、大型发酵罐或生物反应器研制、化工原理等密切结合和应用的结果。发酵工程的产品范围非常广泛。从食品、药品、精细化工产品到许多工业用原料等等，生物可降解塑料PHB等。#细胞工程(cellengineering)#是以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以

3、获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物，并发展有关理论和技术方法的学科。#2．蛋白质工程的主要步骤通常包括：#（1）从生物体中分离纯化目的蛋白；（2）测定其氨基酸序列；（3）借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构;（4）设计各种处理条件，了解蛋白质的结构变化，包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响；（5）设计编码该蛋白的基因改造方案，如点突变；（6）分离、纯化新蛋白，功能检测后投入实际使用。3．发酵工程一般包括以下基本步骤：（1）菌种选育；（2）细胞大规模培养即发

4、酵过程；（3）生产活性产物的诱导；（4）菌体及产物的收获#4．细胞工程的研究范畴#动物细胞与组织培养；植物细胞与组织培养；细胞融合；细胞核移植；染色体工程；胚胎工程；干细胞与组织工程；转基因生物与生物反应器；5．细胞工程技术的应用优质植物快速培育与繁殖；动物胚胎工程快速繁殖优良、濒危品种；利用动植物细胞培养生产活性产物、药品；新型动植物品种的培育；在医学器官修复或移植中的应用；制备转基因动植物的生物反应器；珍稀动植物资源的保存与保护；在遗传学、发育生物学等领域的理论研究；在能源、环境保护等领域的应用细胞培养：将组织块用

5、机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。组织培养：将活体的一小片组织放在盛有培养液的玻璃或塑料培养器皿中，待组织块粘着后，沿底面平面移动生长的过程称为组织培养。#器官培养#：是指采取某些措施使器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的培养技术。6．体外细胞培养物的生长类型1）按生长方式:2型粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生

6、长的细胞。绝大多数有机体细胞属粘附型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。2）根据形态大致的不同，主要2类：上皮细胞型生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状，生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动。成纤维细胞型生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动；游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。其它，不定型7．培养细胞的生长特点贴附；接触抑制；密度抑制培养细胞生命期：是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。包括原代培养期、传代培养期及

7、衰退期。原代培养(PrimaryCulture)期：也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。8．体外培养细胞生存所需基本物质糖；氨基酸；维生素；促生长因子；其它物质细胞融合（cellfusion)，又称体细胞杂交（somatichybridiazation），是指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合形成单个细胞的过程。9．细胞融合的常用方法1）仙台病毒法：仙台病毒诱导细胞融合经四个阶段：①两种细胞在一起培养，加入病毒，在4℃条件下病毒附着在细胞膜上。并使两细胞相互凝聚；②在37℃中，病

8、毒与细胞膜发生反应，细胞膜受到破环，此时需要Ca2+和Mg2+，最适PH为8.0一8.2；②细胞膜连接部穿通，周边连接部修复，此时需Ca2+和ATP；④融合成巨大细胞，仍需ATP。2）聚乙二醇（PEG）法：聚乙二醇(PEG)结构为：HOH2C（CH20CH2）nCH2OH，分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。优点是易