iRNA干预树突状细胞CD40分子表达的实验研究

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1、siRNA干预树突状细胞CD40分子表达的实验研究AStudyofsiRNAoninhibitingtheExpressionofDendriticCellCD40吉林工程技术师范学院-消化内科杨2012.04IBD的发病机制实验内容实验结果讨论结论吉林工程技术师范学院炎症性肠病（InflammatorybowldiseaseIBD）IBD是临床常见的肠道炎性疾病，包括溃疡性结肠炎（Ulcerativeco1itis,UC）和克罗恩病（Crohn,sdisease，CD）两大类。IBD的发病机制可以概括为：1、环境因素；2、遗传因素；3、感染因素；4、免疫耐受。IBD的

2、治疗：1、常规治疗；2、免疫调节治疗；3、生物调控等。吉林工程技术师范学院IBD的发病机制IBD的发病机制-环境因素随着社会的发展，全球IBD的发病率呈明显的上升趋势，首先出现在社会经济高度发达的北美、北欧，继而发生在西欧、南欧，最近才是日本、南美。这种变化产生的主要原因大都是环境因素的改变所导致，大量研究表明，许多看似无关的环境因素，诸如吸烟、饮食、药物、地理环境、社会地位、应激、肠道固有菌群、肠粘膜的渗透性和阑尾切除等这些因素在不同程度上与IBD息息相关。目前公认的假说认为：环境变得越来越清洁，导致儿童期肠道免疫系统接受的外源刺激减弱，由于早年形成的“免疫耐受”不完

3、善，其对肠道抗原刺激发生的免疫反应的自身调节就容易发生障碍，故出现IBD发病率逐渐上升。吉林工程技术师范学院环境因素IBD的发病机制-遗传因素家族聚集性和种族差异性：IBD患者一级亲属发病率，明显高于普通人群。基因：全基因组相关研究(GWAS)已展开，且成为IBD研究的主要手段。阳性家族史：IBD遗传因素中遗传易感性最为重要，其中阳性家族史是最大的“危险因子”IBD不仅是多基因病，而且也是遗传异质性疾病，患者在一定的环境因素作用下因遗传易感而最终发病。吉林工程技术师范学院遗传因素IBD的发病机制-感染因素微生物致病性的观点认为IBD(特别是CD)针对自身正常肠道菌群丛的

4、异常免疫反应引起的。其证据为：①CD病变的部位在肠菌浓度最高的末回与结肠。②CD患者粪便转流术使炎症减轻，复原后炎症加重。③各种动物实验要有细菌定植才发生结肠炎症，隔离的肠攀导入细菌可出现早期IBD的表现。④临床上应用抗生素和微生态制剂有一定的临床疗效。感染与IBD的关系：①肠道感染可以与IBD类似。②感染比IBD更常见。③感染使IBD的病程变得更加复杂。吉林工程技术师范学院感染因素IBD的发病机制-免疫耐受免疫调节细胞。人类β防御素。抗原呈递细胞。人类白细胞抗原。自身抗体因素。Chemerin和脂联素。吉林大学第二临床医院免疫耐受IBD的发病机制-免疫耐受肠道粘膜免疫

5、反应的激活是导致IBD发生、发展和转归过程的直接原因。免疫调节T细胞，能够产生各种细胞因子，引起并逐步放大粘膜炎症，形成肉眼和镜下的IBD病理及临床表现。经典的“双信号模式”即免疫应答的启动、发展过程中，T细胞的活化需要两个信号。其中第二信号即协同刺激信号，它能够促进T细胞的克隆、细胞因子的分泌及产生效应。CD40/CD40L即第二信号，它属于TNF-TNF受体超家族，通过干预调节CD40/CD40L会有助于IBD的治疗。吉林工程技术师范学院免疫耐受IBD的发病机制Sands概括了近10年IBD发病机制研究的标志性成果：(1)肠道免疫耐受控制着生理性炎症；(2)肠道菌群

6、在IBD发病中起着关键作用；(3)用基因动物模型显示遗传免疫和黏膜屏障的多种紊乱形成IBD的各种亚型；(4)NOD2与CD的发生密切相关，且与天然免疫缺陷有关；(5)新生物技术快速发展，研制出多种新的生物治疗药物；(6)TNFα单抗对CD与UC产生较好疗效。吉林工程技术师范学院IBD的发病机制IBD的干预与治疗常规治疗：1、支持治疗；2、常规药物治疗；3、手术治疗。免疫调节治疗。生物调控：1、免疫调控-抗TNF-α抗体英夫利昔(Infliximab)、胸腺肽；2、RNAi干预治疗。阻断CD40途径用于IBD的治疗及展望。吉林工程技术师范学院IBD的治疗实验材料与方法si

7、RNA的设计与合成pHL-CD40真核表达载体的构建感受态细胞的制备重组质粒的提取免疫磁珠分离DCs总RNA的提取、cDNA的逆转录吉林工程技术师范学院实验内容实验材料与方法磷酸钙法瞬时转染CD40分子“Westernblot、PCR”法检测树突状细胞CD40蛋白质及mRNA的表达统计学分析吉林工程技术师范学院实验内容实验研究的目的及意义阐明CD40在IBD中的作用确定siRNA的高效性通过RNAi干预CD40分子的表达治疗IBD的动物实验与临床研究奠定了理论基础。从而为IBD的治疗提供新的途径吉林工程技术师范学院实验内容实验结果吉林工程