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时间:2019-06-15
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1、免疫组织化学技术(immunohistochemistrytechnique)IHCT医学技术与工程学院检验系陈敏免疫组织化学是根据抗原与抗体特异性结合的原理,以细胞中特异成分为抗原,用标记的抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原及其抗体进行定性、定位、定量测定的一种免疫检测技术方法。基本原理:抗原抗体反应标记化学反应呈色化学反应概述与IHCT相关的免疫学基础:抗原:能刺激机体引起抗体的产生,并与相应抗体发生特异性结合的物质—抗体原。抗体:针对某种抗原而产生的,并能识别相应抗原,与其发生特异性结合第一节抗原1.概念凡能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答;并能与相应
2、的在体内或体外发生特异性结合的物质称为抗原(Antigen,Ag)。刺激机体免疫系统特异性反应特异性反应抗原(图示)上页抗原主要具有两方面的特性,抗原能引起机体产生抗体(和/或致敏淋巴细胞),称之为免疫原性;抗原还与相应的抗体(及致敏淋巴细胞)发生特异性结合或反应,称为免疫反应性。免疫原性抗原免疫反应性FujianBloodCenterhttp://www.fjxyzx.org/2.抗原的化学结构一个天然抗原具有二种结构,一是高分子的载体(免疫原性)二是抗原决定簇(特异性)3.抗原的性质异物性、大分子、特异性为抗原的共同性质,凡种系越远、分子量越大、构型越复杂、抗原决定簇暴露越多,则其抗原性
3、越强,特异性越高。。抗原的免疫原性(一)异物性(二)理化特性1.分子量2.化学组成和结构3.物理性状下页异物性返回概念:指该抗原与自身正常组织成分的差异程度。异物性分类①异种物质②同种异体物质③自身物质完理化特性1.抗原的分子大小分子量越大,免疫原性越强:1.表面的抗原决定簇多,对淋巴细胞的活化作用强。2.大分子物质溶于水中呈胶体状,化学结构较稳定,不易被机体破坏或排除,体内存留时间长。2.化学组成和结构复杂蛋白质:大分子,免疫原性强。多糖:细菌荚膜多糖有免疫原性。核酸:免疫原性弱核蛋白:有免疫原性。类脂:无免疫原性2.抗原分子的化学组成和结构氨基酸残基的位置和间距与免疫原性关系3.物理性状
4、*含芳香族氨基酸较多的蛋白质,免疫原性强,反之则较弱*聚合体蛋白质分子:免疫原性强*单体可溶性蛋白质分子:免疫原性弱说明:抗原物质化学成分和结构越复杂,其免疫原性就强。抗原的特异性1.即专一性能;2.是免疫应答的基本特点;3.是免疫学诊断与防治的理论依据;免疫反应特异性的物质基础---抗原决定簇(antigenicdeterminant)或表位(epitope):是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。大多数蛋白质抗原可有多个抗原决定簇,但由于空间位阻作用,在同一时间内仅有部分抗原决定簇暴露和相应的抗体结合。抗原结合价:一个抗原分子上能与相应抗体分子结合的抗原决定簇总数。共同抗原表位与交
5、叉反应*共同抗原(commonantigen):两种不同抗原具有相同或相似的抗原决定簇,互称共同抗原。*交叉反应:由共同抗原决定簇刺激机体产生的抗体可以和两种共同抗原结合发生反应。●天然抗原有多个抗原决定簇,故为多价抗原。●半抗原仅有一个抗原决定簇,故为单价抗原。抗原的类型繁多,分类方法也很多,故抗原的名称各种各样。根据溶解性抗原有可溶和不溶性两类。抗原的种类返回第二节抗体1.抗体的概念抗体(antibody)是机体受抗原刺激后通过体液免疫应答,由B淋巴细胞活化、增殖、分化的浆细胞合成并分泌的,能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。有关概念免疫球蛋
6、白:是浆细胞产生的球蛋白。1、抗体(antibodies,Ab):是机体免疫细胞受抗原物质刺激后产生的,能与相应抗原特异性结合,并具有多种免疫学、生物学活性的球蛋白。2、免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig):指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。抗体是免疫球蛋白,而免疫球蛋白不都具有抗体活性。抗体是生物学和功能上的命名,而Ig是结构和化学本质上的概念。免疫球蛋白的基本结构(一)重链(heavychain,H)2条轻链(lightchain,L)2条(二)可变区(variableregion,V区)恒定区(constantregion,C区)(三)铰链区(hingeregi
7、on)(四)结构域①Ig单体的基本结构是由二条相同的轻链和二条相同的重链组成,各自链间(轻–重或重–重链)由二硫键(–S–S–)相连接,呈Y字构型(图解)②Ig分子的氨基酸构型可分为可变区(N-端)和恒定区(C-端)两部份。基本结构基本结构可变区(variableregions,V区)位于免疫球蛋白多肽链的N端,占轻链的1/2与重链的1/4。该区的氨基酸组成及排列顺序随抗体特异性不同而发生变化。它赋予抗体以特
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