NK细胞课题(1)

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1、福建医科大学08级硕士研究生学位论文开题报告课题题目慢性乙型肝炎患者NK细胞与肝细胞损伤程度的关系研究单位：福建医科大学附属第一医院硕士研究生：胡敏鹂学科、专业：消化内科学专业导师：江家骥教授时间：2010年5月8日一．研究背景和立题依据乙型肝炎病毒(HBV)感染是目前导致肝脏疾病的主要病因。据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染者，并且每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(HCC)，因而是医学界关注的重点。人感染HBV后，病毒持续6个月仍未被清除者称为慢性HBV感染。慢性乙型肝炎的自然史是以反复肝炎发作和缓

2、解为特征，一般可分为3个期，即免疫耐受期、免疫清除期和非活动或低（非）复制期。特别是在免疫清除期，临床上常表现为HBeAg出现，血清HBVDNA滴度>105拷贝/ml，血清转氨酶持续或间歇升高以及肝组织病理学有坏死炎症。慢性乙型肝炎的发病机制较为复杂，迄今为止还远远未能阐明。普遍认为HBV本身不直接损害肝细胞，而是机体清除HBV时引发的一系列宿主免疫反应异常，是发病机制中的主要环节，导致肝细胞功能的损伤。因而此期的炎症波动为我们研究肝脏炎症活动的影响因素提供了一个良好的契机。目前迫切需要了解参与HBV清除的免疫反应中哪些分子机制涉及HBV感染的肝损伤，这将有助于增强病毒控制同时抑制

3、或阻碍肝脏炎症，形成合理的免疫治疗方案。NK细胞是介导肝脏损伤的主要组成传统观念认为感染HBV患者的免疫介导肝损伤原因是病毒特异CD8+T细胞即细胞毒性T细胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)通过细胞毒机制杀死感染肝细胞。但近来的许多研究中发现在病毒特异性CTL不足以控制病毒复制的情况下，可以募集其他炎症细胞，造成肝脏的损伤。而渗入的非特异性淋巴细胞的最大组分之一是NK细胞。已经证实，人体肝脏含有大量的天然免疫细胞如NK细胞、NKT细胞、γδT细胞等，此类细胞约占整个肝脏淋巴细胞的2／3。其中NK细胞约占30％，NKT细胞也近30％，而传统T细胞亚群(CD3+CD

4、56-)仅占30％左右。那么仅占肝脏淋巴细胞总数1/3的这类T细胞能否承担肝脏抗HBV免疫与损伤的全部职责,值得重新定位。而天然免疫细胞尤其是NK细胞在肝脏形成的这种“优势状态”可能也预示了其在肝脏免疫系统中前途不可估量。并且国内外越来越多研究小组利用小鼠模型证实肝脏NK细胞参与肝细胞免疫损伤，如转基因小鼠模型中，通过低剂量ConA刺激后经NKG2D/NKG2D配体识别内NK细胞诱导炎症肝损伤【1】,但还远远未阐明NK细胞是通过何种分子和途径介导肝脏损伤的。NK细胞杀伤感染的肝细胞一般可能是通过两条途径：一是通过天然病毒活性直接杀伤肝细胞，二是分泌细胞因子如IFN-γ，TNF-a，

5、IL-2等，此外活化NK细胞表达Fas（CD95）配体和TRAIL分子，可以诱导感染肝细胞通过内源酶的级联反应发生凋亡。近年来越来越多的研究发现，NK细胞在杀伤感染肝细胞的同时，也诱导了炎症的发生。由于临床研究的诸多限制，目前这类研究大多局限在动物模型的探索。由于人体内生理活动的复杂性，动物模型上所得到的验证只能作为理论上的参考，因而这些结果在人体上的充分验证是当前研究急需解决的首要任务。NK细胞胞毒活性影响肝脏损伤研究发现作为天然免疫系统的组成之一，NK细胞具有不需要特异性抗原的刺激就能直接杀伤被感染的细胞能力，此为NK细胞的天然细胞毒性。但是它的具体作用机制尚未完全阐明。近来Z

6、ouY等【2】利用感染MHV-3的Balb/cJ小鼠制作暴发性肝炎模型，肝脏NK细胞为效应细胞，肝细胞（YAC-1）为靶细胞，体外细胞毒试验证实肝脏NK细胞对病毒感染的肝细胞的杀伤活性显著增强。提示肝脏NK细胞可能通过自身的胞毒活性损伤肝细胞，形成炎症。但暴发性肝炎与慢性乙型肝炎的发病机制还是有很大差异，因此还需要做进一步证实。而在HBV转基因小鼠代表的慢乙肝携带者中NK细胞的活性和细胞毒性明显下降。他们认为是与NK细胞内在功能缺陷相关。此外，有学者在研究肝癌患者时也发现外周血NK细胞的胞毒活性下降，杀伤靶细胞能力减弱的情况出现【3】。我们推测NK细胞的天然胞毒活性强度与肝炎的活动

7、程度相关。由于人临床试验的限制，人NK细胞自然胞毒活性对肝脏损伤的研究很少，特别是不同炎症状况下，NK细胞胞毒活性是否有差异也不清楚。因而必要在这一方面进行相应的研究，为了解在病毒感染后天然免疫反应的直接杀伤作用提供依据。此外，有研究发现NK细胞的天然胞毒活性与其表面的NKG2D表达相关。NKG2D是近年确定的一种含胞外C型凝集素的NK细胞活化受体，表达于NK细胞，NKT细胞，γδT细胞及CD8(+)αβT细胞等效应细胞表面。在转基因小鼠模型上，通过多角度研究发现低剂