高中生物同步课件：6.2dna片段的扩增--pcr技术(中图版选修1)

《高中生物同步课件：6.2dna片段的扩增--pcr技术(中图版选修1)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第2节DNA片段的扩增——PCR技术学习导航1.理解PCR扩增DNA片段的原理。[重点]2.尝试PCR技术的基本操作和应用。[难点]新知初探思维启动一、DNA在细胞内的复制1.所需的酶：___________酶、DNA聚合酶和RNA聚合酶等。2.引物：___________。3.原料：__________________。4.原则：___________________。DNA解旋一段RNA四种脱氧核苷酸碱基互补配对原则二、PCR及其过程1.概念：PCR即聚合酶链式反应，实际上是在_____模拟细胞内的_________

2、______，形成大量__________的DNA片段。体外DNA复制过程特异性2.过程条件过程加样室温把PCR缓冲液、_________、一对引物、四种脱氧核苷酸、DNA聚合酶、Mg2＋等成分加入到微量离心管中DNA模板氢键一对引物DNA聚合脱氧核苷酸判一判(1)细胞内DNA复制和PCR技术所需的引物一样，都是RNA。(×)(2)经PCR技术合成的DNA分子中，每条单链都含有引物。(×)(3)PCR实验的原理和操作都十分复杂，不易于操作。(×)(4)经过高温变性、低温复性和中温延伸三步操作，DNA片段可呈指数增长。(√

3、)三、实验操作1.准备(1)为了避免__________等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、吸头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行_________。(2)如果没有PCR仪，可以设置3个恒温水浴锅，温度分别为______、______和______，然后按要求在3个水浴锅中来回转移PCR的微量离心管即可。外源DNA高压灭菌95℃55℃72℃PCR热循环260nm想一想决定PCR反应特异性的原因有哪些？【提示】待扩增DNA片段的特异性。要点突破讲练互动要点一PCR技术与体内DNA复制的比较细胞内复制PCR反应解旋

4、在解旋酶作用下,细胞提供能量，部分解开加热至90℃以上时，双链全部解开酶DNA解旋酶、DNA聚合酶耐高温的DNA聚合酶引物一小段RNA单链DNA细胞内复制PCR反应能量ATP不加循环次数生物自身控制30多次子链合成一条链连续合成,另一条链不连续合成两条子链为连续合成,温度为72℃产物完整DNADNA片段相同点①需提供DNA复制的模板②四种脱氧核苷酸为原料③碱基互补配对原则④子链延伸的方向都是从5′端到3′端特别提醒①PCR反应需要可变的温度，而体内DNA复制需要稳定的温度。②DNA解旋酶的作用是使DNA两条链的氢键断开；

5、DNA聚合酶的作用是将单个脱氧核苷酸加到已有的单链片段的3′端上，需要模板;DNA连接酶连接的是两条DNA片段的缺口，不需要模板。PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是()①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA②PCR过程不需要DNA聚合酶③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制例1A．③④B．①②C．①③D．②④【解析】PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比较，主要有两点不同：①PCR过程需要的

6、引物是人工合成的单链DNA，长度通常为15～40个核苷酸。②PCR过程中，DNA解旋不依赖解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的。【答案】C变式训练(2012·成都七中高二检测)下列关于DNA复制和PCR的描述中，正确的是()A．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链B．DNA复制不需要引物C．引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合D．PCR扩增的对象是氨基酸序列解析：选C。由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链，故DNA复制需要引物，而且它与DNA母链通过碱基互补配对

7、结合。PCR扩增的对象是DNA，而不是氨基酸。2.PCR扩增过程变性复性延伸预变性95℃，5min55℃，1min72℃，1min重复30次95℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次循环－－72℃，1min图示：3.DNA扩增数目的理论计算理论上DNA扩增呈指数增长。若只有一条DNA模板，则复制n次后有2n条；若一开始有m条DNA模板，则复制n次后有m×2n条；实际操作过程中，由于无关变量的影响，一般来说实验值要略小于理论值。近20年来，PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室的一种常规实验手段，其原理

8、是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如图)，在短时间内,将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，从而使实验室所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。例2(1)加热使DNA双链间的__________键完全打开，称为__________；而在细胞中是在__________酶的作用下进行的。(2)如果只需要大量