需氧革兰阳性杆菌及检验

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1、需氧革兰阳性杆菌及检验华中科技大学同济医学院附属协和医院熊艳革兰阳性杆菌菌属间的鉴别棒状杆菌属芽胞杆菌属李斯特菌属丹毒丝菌属加特纳菌属形态棒状杆菌有芽胞短杆、链或丝状细杆或丝状杆菌、多形性触酶+++--动力-V+--对氧需氧，兼性厌氧需氧，兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧V：炭疽芽胞杆菌阴性，其它芽胞杆菌阳性。第一节棒状杆菌属棒状杆菌属的共同特征革兰阳性多形态杆菌无荚膜、无鞭毛、无芽胞细菌呈不规则栅栏状排列需氧或兼性厌氧触酶试验阳性细胞壁结构和血清学分析，证实与分枝杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。一．白喉棒状

2、杆菌（一）生物学特性形态与染色培养特性菌落特征生化反应抗原构造抵抗力形态与染色细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。用美蓝、Neisser法、Albert法等染色时，在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，此颗粒与菌体着色不同，称为异染颗粒，为本菌重要形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。2021/7/21培养特性需氧或兼性厌氧，生长温度为15–40℃，最适生长温度为35–37℃，pH7.2–7.8。营养要求高，在普通培养基上虽能生长，但生长不

3、良，形态不典型，大多需要特殊氨基酸。在加有血液、血清或鸡蛋的培养基上生长迅速，形态典型，异染颗粒明显。2021/7/21菌落特征血平板：灰白、狭窄β溶血环。鸡蛋斜面和血清斜面：生长迅速，灰白色有光泽菌落。亚碲酸钾血平板：为选择培养基，菌落呈黑色。菌落分为重型、轻型或中间型。生化反应触酶（+），氧化酶（-）能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等，产酸不产气。不分解乳糖、多数不分解蔗糖。靛基质试验－、明胶液化－、尿素分解－2021/7/21抗原构造菌体O抗原：与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原。K抗原：型特异性抗原，不耐热。抵抗

4、力对湿热和一般消毒剂敏感。对冷和干燥有一定抵抗力。（二）致病性致病物质：白喉外毒素由携带β-棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。作用机制：抑制细胞内蛋白质的合成。经呼吸道飞沫传播，引起白喉。假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。（三）免疫性抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。成人绝大多数具有免疫性，主要由于隐性感染所获得的免疫力。锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素抗体存在。（四）微生物学检验标本采集检验程序检验方法生化反应毒力试验标本采集用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边

5、缘采集分泌物。未见假膜的疑似患者或带菌者可采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。检验程序咽拭标本亚碲酸钾血平板观察菌落特征直接涂片革兰染色异染颗粒染色血平板吕氏血清斜面直接涂片革兰染色异染颗粒染色涂片染色镜检生化反应毒力试验检验方法标本直接涂片革兰染色：观察形态、染色性异染颗粒染色：观察异染颗粒初步报告：检出形似白喉棒状杆菌分离培养吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显亚碲酸钾血平板：黑色菌落生化反应根据糖发酵是否产酸可鉴别棒状杆菌中的不同种。白喉棒状杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖产酸，不分解蔗糖；尿素酶（–）、硝酸盐

6、还原试验（+）等可用于与其他棒状杆菌的鉴别。毒力试验意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据方法艾立克平板毒力试验对流电泳法协同凝集试验动物实验二．其他棒状杆菌第二节需氧芽胞杆菌属芽胞杆菌属共同特点绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于菌体横径的芽胞除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血能力非抗酸性营养要求不高，在普通培养基上生长良好一．炭疽芽胞杆菌（一）生物学特性形态与染色培养特性菌落特征生化反应抗原构造抵抗力形态与染色为致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平或凹陷，呈竹节状，单个或呈短链状排列。无鞭毛，形成芽胞，有毒菌

7、株可形成荚膜。人工培养或在外界环境中易产生芽胞，在活体或完整未经解剖的尸体内不形成芽胞，所以炭疽病尸体严禁解剖。2021/7/21培养特性需氧或兼性厌氧。营养要求不高，普通培养基上生长良好。2021/7/21菌落特征普通琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，无光泽，边缘不整齐，在低倍镜下可见到菌落边缘呈卷发状。血液琼脂平板：培养12～15h，菌落周围无溶血环，18～24h后可有轻微溶血，而其他需氧芽胞杆菌大多数溶血明显而快速。液体培养基中呈絮状生长明胶培养基中呈倒置的杉树有毒株在NaHCO3培养基中形成荚膜

8、，菌落呈粘液状，有拉丝。2021/7/21有毒株在NaHCO3血琼脂平板上置5%CO2环境中培养18～24h，可产生荚膜，菌落由粗糙型变为粘液型，而呈现半圆形，突起，有光泽的菌落。以接种针挑取时呈拉丝状，此为鉴别菌落要点，而无毒株则形成粗糙型菌落。生化反应分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。不分解乳糖。触酶（+），VP（–），吲哚（–），尿素（–）。抗原结构炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子、水肿因