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1、第29卷第2期浙江工业大学学报Vol.29No.22001年6月JOURNALOFZHEJIANGUNIVERSITYOFTECHNOLOGYJune2001文章编号:1006-4303(2001)02-0120-04分光光度法测定红发夫酵母中虾青素含量许培雅,郑裕国,沈寅初(浙江工业大学生物与环境工程学院,浙江杭州310032)摘要:建立了测定红发夫酵母胞内虾青素含量的前处理工艺及分光光度分析方法。其前处理工艺一次提取率达96.2%,提取液在480nm处有最大吸收,建立的分光光度法加标回收率为100.2%~104.1%,标准偏差为0.21%~0.43%,表明该分
2、析方法准确性高,重复性好,且简便、快速,可以作为菌种筛选、发酵条件优化过程中快速测定菌体中虾青素含量的方法。关键词:分光光度法;红发夫酵母;虾青素中图分类号:Q815;O657.3文献标识码:AAnalysisofastaxathinfromphaffiarhodozymabyspectrophotometryXUPe-iya,ZHENGYu-guo,SHENYin-chu(CollegeofBiological&EnvironmentalEngineering,ZhejiangUniversityofTechnology,Hangzhou310032,China
3、)Abstract:Atechniqueoftreatmentbeforeassayandananalyticalassayofastaxathinweredesignedfromphaffiarhodozymabyspectrophotometry.Thepercentageofextractionreached96.2%inthetechniqueoftreatmentbeforeassay.Themaximumabsorptionofthesolutionlayis480nm.Therecov-eryis100.2%~104.1%;andthestandar
4、ddeviationis0.21%~0.43%.Themethedissimpleandapplicabletoanalysisofastaxathinfromphaffiarhodozymainthefiltrationofmutantstrainandtheoptimizationoffermentationcondition.Keywords:spectrophotometry;phaffiarhodozyma;astaxathin0前言虾青素(3,3c-二羟基-4,4c-二酮基-B,Bc-胡萝卜素)属于一种类胡萝卜素,是甲壳类动物,如虾、蟹、三文鱼和鲑鳟鱼
5、的主要色素。它具有很强的抗氧化功能,能清除体内由紫外线照射产[1]生的自由基,调节降低这些由光化学引起的伤害,对紫外线引起的皮肤癌有很好的治疗效果。它能治疗由糖尿病引起的白内瘴以及由用电脑和看电视过多引起的眼病,虾青素已经越来越多地受到各国科学家的重视。虾青素的天然来源主要有:甲壳类动物,雨生红球藻和红发夫酵母。目前,收稿日期:2000-10-17;修订日期:2001-02-18基金项目:浙江省院士基金项目(2000268)作者简介:许培雅(1964-),女,浙江鄞县人,实验师,主要从事生化物质的分离纯化和检测方面的研究。第2期许培雅,等:分光光度法测定红发夫酵母
6、中虾青素含量#121#用红发夫酵母生产虾青素的研究已在全球兴起。虾青素的定量分析是从事虾青素研究、生产及应用所不可缺少的基本方法,然而,虾青素是胞内物质,酵母细胞的细胞壁不容易破碎,这给酵母中虾青素含量测定带来了困难。酵母细胞的破壁方法一般有:物理法(机械碾磨、超声波)、化学渗透法、酶法(包括自溶法)和酸热法几种。物理法需要增加昂贵的设备,且效果并不十分理想;酶法虽然条件温和,但破壁时间长,不适合定量分析;酸热法条件难以控制,且虾青素在酸性条件下不稳定;有机溶剂渗透法适合于需要测定的样品量多的情况。经过多次实验以及各种有机溶剂提取效果的比较,我们得到了用有机溶剂进
7、行破壁提取,然后用分光光度法或高效液相色谱法来测定其含量的一种分析方法。高效液相色谱法灵敏度高,试样用量少,但设备昂贵,大批量测定耗时长。分光光度法,其灵敏度高,且操作简便、快速、经济,特别适合大批量测定。1实验部分1.1仪器与试剂高效液相色谱仪(日本岛津公司),721型分光光度计或751型分光光度计(上海分析仪器厂),恒温水浴锅,高速冷冻离心机(日本日立公司);虾青素标样(Sigma公司),丙酮(A.R),二甲基亚砜(A.R),甲醇(A.R),冰醋酸(A.R),混合破壁试剂:由冰醋酸和二甲基亚砜按一定比例配制而成,混合提取试剂:由甲醇和氯仿按一定比例配制而成。1
8、.2实验方
