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《表面活性荧光探针分子与牛血清蛋白的相互作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第25卷,第9期 光谱学与光谱分析Vol125,No19,pp1443214452005年9月SpectroscopyandSpectralAnalysisSeptember,2005表面活性荧光探针分子与牛血清蛋白的相互作用3徐同宽,李 娜,沈兴海,高宏成北京大学化学与分子工程学院应用化学系,北京 100871摘 要 研究了两种表面活性荧光探针分子22(对2十二烷基氨基)苯基23,32二甲基252乙酯基23H2吲哚基2甲基2二2十六烷基碘化铵(1)和22(对2十二烷基氨基)苯基23,
2、32二甲基252乙酯基23H2吲哚基2二甲基2十八烷基碘化铵(2)与牛血清蛋白(BSA)之间的相互作用。根据结合反应的温度效应求得热力学函数并推断探针分子与BSA结合的作用力类型;分子1和2与牛血清蛋白之间存在能量转移现象,根据FÊrster非辐射能量转移理论计算得到给体2受体之间的距离分别为2190和4102nm。主题词 取代3H2吲哚季铵盐;牛血清蛋白;共振能量转移中图分类号:O65713 文献标识码:A 文章编号:100020593(2005)0921443203引 言 通过荧光发射峰、荧光强
3、度、能量转移及荧光寿命等项研究可以为蛋白质中荧光生色基团的结构及所处的微环境提[1]供有用的信息。取代3H2吲哚季铵盐化合物是一种表面活性的荧光探针分子,它对所处微环境的变化具有很高的灵敏[2]性,是一类很好的用于研究微环境变化的探针分子,可以[3]用于研究与蛋白质的相互作用。在前面的研究中,我们利用光谱法初步研究了化合物1与牛血清蛋白在生理pH条件Fig11Structuresofsubstituted3H2indolequaternary下的相互作用,证明该化合物与牛血清蛋白的猝灭作用是静ammoniu
4、msalt态猝灭,测定了其结合常数和结合位点数。本文在此基础上继续研究了将3H2吲哚季铵盐的一个边长链变短后(即分子F24500型荧光光度计(含控温系统),Hitachi;UV30102)与牛血清蛋白之间的作用,比较了两个探针分子与牛血清Spectrophotometer,Hitachi;pHS23B精密pH计,上海雷磁仪蛋白结合的强弱,并根据其结合反应的热力学函数得到探针器厂。分子与BSA的作用力类型;又根据FÊrster非辐射能量转移113 实验方法理论计算出给体2受体之间的距离。配制化合物1和2的甲醇
5、储备液备用。配制015mol·-11 实验部分L的Tris2HCl缓冲溶液(pH714)和019%的生理盐水。测定方法:在5mL容量瓶中依次加入吲哚探针分子、015mL缓111 试剂与仪器冲溶液、BSA溶液,再用生理盐水定容,测定。所用水均为三牛血清白蛋白(北京双旋微生物培养基制品厂),电泳次水。纯;三羟甲基氨基甲烷(Tris,含量不少于99%,上海化学试剂公司分装厂);荧光探针分子1和2的合成初步结果见文献2 结果与讨论[4],详细结果见文献[3],结构式见图1。211取代3H2吲哚季铵盐(分子2)对牛血
6、清蛋白的猝灭作用[4]在前面的工作中我们证实了分子1与牛血清蛋白的结收稿日期:2004203201,修订日期:2004206206 基金项目:国家自然科学基金(90206020,29901001)资助项目作者简介:徐同宽,1969年生,北京大学化学与分子工程学院应用化学系博士 3通讯联系人 光谱学与光谱分析 第144425卷合反应属于静态猝灭,并根据Stern2Volmer方程得到二者的[6]有关,关系式为结合常数。本实
7、验证明分子2对牛血清蛋白的结合反应也属6(R66E=R0/0+r)(3)于静态猝灭,根据相同的实验方法和实验数据处理方法(图其中R0为转移效率为50%时供体与受体之间的临界距离,略)求得分子2与牛血清蛋白作用的Stern2Volmer结合常数被称为FÊrster距离。和结合位点数(见表1,表中分子1的结果引自文献[4])。R6-25(K2Φn-4J)(4)0=818×102其中K为偶极空间取向因子,n为介质折射指数,Φ为给Table1TheStern2Volmerbindingconstantof3H2in
8、dole体的荧光量子产率,J为给体的荧光发射光谱与受体的吸收withbovineserumalbumin(roomtemperature)光谱间的重叠积分。Stern2Volmerbinding4constantBindingconstantBinding∫FD(λ)εA(λ)λdλsiteJ=(5)KsvrKassocrnumber∫FD(λ)dλ4-1)4-1)/(10L·mol/(10L·mol其中FD(λ
