流动注射荧光法测定羟基自由基

《流动注射荧光法测定羟基自由基》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第31卷分析化学(FENXIHUAXUE)　研究简报第6期2003年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry723～725流动注射荧光法测定羟基自由基3刘立明　宋功武　刘丽虹　方光荣(湖北大学分析测试中心,武汉430062)2+3+4+摘　要　研究Sn催化H2O2产生的·OH的反应,·OH与Ce作用后氧化生成无荧光的Ce。通过测定3+Ce的荧光强度的变化可间接测定所产生的羟自由基,并结合流动注射技术,确定了体系最佳实验条件。测定抗氧化剂清除羟自由基的实验,证明该体系可作为在

2、线筛选抗氧化剂的方法之一。关键词　荧光法,羟自由基,流动注射1　引　　言羟自由基(·OH)是一种氧化能力很强的自由基,它能够很容易地氧化各种有机物和无机物,氧化效率高,反应速率快,是造成组织脂质过氧化、核酸断裂、蛋白质和多糖分解的活性氧,与机体的衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬有关。近年来,国内外文献报道的检测羟自由基的主要方法有电子自旋共振12345,6法、高效液相色谱法、化学发光法、比色法、光度法等。分光光度法和荧光法简便实用,但采2+用流动注射荧光法报道甚少。实验以H2O2为氧化剂,Sn与H2O2作用产

3、生·OH,该反应类似Fenton反73+4+3+应,Ce与·OH作用后氧化生成无荧光的Ce,通过测定Ce的荧光强度的变化间接测定所产生的羟自由基。该法仪器简单,操作简便,测定快速,适于羟自由基的在线测定和监控。2　实验部分2.1　仪器与试剂RF2540荧光分光光度计(日本岛津公司);LZ21000型流动注射仪(沈阳肇发自动分析研究所)。-42+-43+-3-5H2O2溶液3.0×10molPL;Sn溶液1.0×10molPL;Ce溶液8.03×10molPL;H2SO45.0×10-3-3molPL;抗坏血

4、酸1.0×10mol/L;硫脲1.0×10molPL。所用试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水。2.2　实验方法3+2+2.2.1　流动注射实验流程及羟自由基的测定　流程图见图1。Ce和H2SO4由载流C1进入,Sn溶液由载流C2进入,H2O2溶液由载流R进入,清除剂样品由进样阀S注入150μL。流速2.5mL/min,管长1.5m,管径0.8mm,测定周期50s,循环4次。在356nm(λex=262nm)处测定荧光强度。2.2.2　羟自由基清除率的测定　在2.2.1体系中,羟自由基清除剂由进样阀S注入,

5、测定其荧光强度　图1　流动注射装置流程FS,未加清除剂的空白体系其荧光强度F0;未加Fig.1Flowprocessdiagramofthedevice2+C,R.载流(carriersolution);S.进样阀(samplingvalve);P.泵Sn溶液及清除剂的体系其荧光强度F,则清除率(pump);D.检测器(fluorometricdetector);W.废液(waste)。D按以下公式计算D=(FS-F0)P(F-F0)×100%。2002207221收稿;2003201213接受724分析化

6、学第31卷3　结果与讨论3.1　荧光光谱3+3+在酸性介质中Ce的最大激发波长在262nm,荧光峰在356nm(图2)。当Ce与·OH作用后氧化4+3+4+生成无荧光的Ce,荧光强度明显降低,并且Ce氧化生成Ce的量与体系荧光强度降低值成正比,通3+过测定Ce的荧光强度的变化间接测定所产生的羟自由基。3.2　反应条件的选择3.2.1　酸度的影响　实验不同浓度的H2SO4溶液,发现随着体系酸度的升高,相对荧光强度(ΔF)升-4高,H2SO4浓度为1.0×10molPL时体系相对荧光强度趋于稳定。3+3.2.2

7、Ce浓度的影响　在H2SO4介质中,加入不3+3+同浓度的Ce溶液,发现随着Ce浓度的增加,体系ΔF与浓度呈线性关系。为便于观察筛选抗氧化3+3+2+　图2Ce及Ce2Sn2H2O2荧光光谱药物及清除羟自由基的实验中的荧光强度变化,本3+3+2+Fig.2FluorescenceofCeandCe2Sn2H2O2system3+-5实验选用Ce的浓度为8.03×10molPL。3+-5-4Ce8.03×10molPL;H2O23.0×10molPL;H2SO41.0×2+3.2.3Sn浓度的影响　其它条件不

8、变加入不同-42+2+-510molPL。1,3.Sn0;2,4.Sn1.0×10molPL。2+2+浓度的Sn溶液,发现随着Sn的浓度增加,ΔF也-4增强,在浓度为5.0×10molPL时体系相对荧光强度较大且线性良好。3.2.4H2O2浓度的影响　其它试剂浓度不变,改变H2O2浓度,测定其荧光强度,发现随着H2O2浓度-4的增加,体系ΔF先升高后降低,故本实验H2O2溶液浓度为3.0×10molPL。3.2.