外源载体高效转化肺炎克雷伯菌的新途径

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1、!"卷!期微生物学报!（"!）："#&’"#!#$$"年%月!日!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$!()*)+,#$$"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!外源载体高效转化肺炎克雷伯菌的新途径郑艳，刘喜朋，刘建华"（上海交通大学生命科学技术学院生物化学与分子生物实验室上海#$$#!$）摘要：研究介绍了提高!"#$%&#""’()#*+,)&’#电转化效率的新途径，即直接从固体平板上收集!B()#*+,)&’#菌落—制备电转化感受态细胞，完全不同于传统的试验方法。试验菌株为

2、野生型!B()#*+,)&’#H1IJ8K#$!!和+’-.突变型菌株。将大小不同的质粒LMN%!-1、LMN%!-1@?5O、LMN%!-1@?51电转化!B()#*+,)&’#，计算电转化效率。电转化试验结果表明：!B()#*+,)&’#H1IJ8K#$!!固体菌电转化效率高达#P&$.Q-$$转化子/!*RH(，而其液体菌电转化—"效率仅为&.$Q&$转化子/？*RH(；其+’-.突变株固体菌的转化效率最高，可以达到-S!P&$Q.$$转化子/!*!倍。同时发现质粒大小对电转化效率并没有明显影响。此外，激光共聚焦显RH(，比液体菌电转化效率提高了&$微镜观察发现固体

3、平板和液体培养基中的菌体存在形态学方面差异，推测固体培养菌电转化效率的显著提高和形态学方面的表现可能具有一定的相关性。关键词：电转化；!"#$%&#""’()#*+,)&’#；转化效率中图分类号：T9-9文献标识码：(文章编号：$$$&87#$9（#$$"）$!8$"#&8$!肺炎克雷伯菌（!"#$%&#""’()#*+,)&’#）是一种常见的革兰的最外层成分）缺失菌来提高电转化效率。但是，由于!B氏阴性机会致病菌，是导致医院感染的重要原因之一，例如：()#*+,)&’#本身特殊的荚膜结构，使得研究人员操作方面的肺炎、菌血症、尿道炎症等。主要发生在老年人、营养不良、细微差

4、异会在很大程度上影响电转化的结果。本文在传统慢性酒精中毒、慢性支气管8肺疾病和全身衰竭的患者，死亡方法基础上建立了一种更为有效的!B()#*+,)&’#电转化方［&］率高。因此，!B()#*+,)&’#受到了研究人员的广泛关注。法，操作简单方便，结果稳定。希望我们的转化方法可以对然而!B()#*+,)&’#较低的电转化效率在很大程度上限制了从事!B()#*+,)&’##遗传学研究的科学工作者有所帮助。其遗传学方面的研究。国外以前的报道中，一些学者采用在!材料和方法［#］UO液体培养基中加入0503#或离子螯合剂：水杨酸钠、乙［-］!"!材料与仪器二醇二（乙醚二胺）四乙酸、

5、乙二胺四乙酸等，可以一定程度上抑制!B()#*+,)&’#的荚膜生成，降低其荚膜生成量，从!"!"!实验菌株和质粒：本试验所用菌株和质粒列于表&。［!］而提高质粒转化效率。另外一些学者利用V抗原（脂多糖表!试验菌株和质粒15W32&O5C,2X<53+,X5<>+5>@L35+;<@+)+2@<>,?<+YZXFO5C,2X<53+,X5<>+ZXL35+;<@+[2>Z,L2ZXX232G5>,@2+CX"]2E2X2>C2ZX+Z)XC2O5C,2X<5!"#$%&#""’()#*+,)&’#+,X5<>+03<>

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