《不同温度处理对番茄离体花柄脱落及其相关酶活性的影响》

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1、万方数据万方数据第6期李晓红等：不同温度处理对番茄离体花柄脱落及其相关酶活性的影响·781．花柄为试材，研究不同温度对番茄离体花柄脱落的影响，以及脱落过程中离体花柄离区可溶性蛋白、纤维素酶以及多聚半乳糖醛酸酶活性的变化．可进一步深入研究高温引起番茄落花的机制，对生产实践具有一定的指导意义。1材料与方法1．1材料试验在沈阳农业大学蔬菜基地进行，供试番茄品种为辽园多丽。2006年3月15日播种，4月20日定植于日光温室内。除不蘸花外，其他管理均与正常生产相同。1．2方法选取各植株相同或相近位置花序上当日开放的花(即花瓣开放成900，花瓣呈新鲜的黄色)，用

2、自来水充分冲洗，再用蒸馏水冲洗3次，剪去花柄上端花冠，只留花柄部分，正向插入盛有1％琼脂培养基(pH值6．4)的培养皿中．每个培养皿中插入40～50个小花柄外植体⋯J，随后将其放人底部开口的玻璃培养箱中，底部用水密封，最后将玻璃培养箱分别放入SANYO多用途植物培养箱(MLR一350H)中培养，设计25，30，35℃共3个温度处理，分别在处理8，16，32h进行各项指标测定，所有试验均3次重复。1．3测定指标1．3．1番茄花柄外植体脱落率调查和可溶性蛋白含量测定以用镊子沿花柄上段弯曲的方向轻碰一次就断裂为标准．调查番茄花柄外植体脱落率。采用考马斯亮蓝

3、G一250法【12】，测定可溶性蛋白的含量。1．3．2番茄花柄外植体离区粗提液制备取花柄外植体离区0．59，加入2mLpH值7．2的磷酸缓冲液，在0～4℃冰浴中研磨提取，提取液倒入离心管中，再分别用1mL的溶液冲洗研钵2次，共4mL，一并倒人离心管中，4℃下120009离心20min，取上清液4℃保存，作为纤维素酶与多聚半乳糖醛酸酶的粗提液。1．3．3纤维素酶活性测定取2支试管，分别加入1mL酶液，然后在1支试管中加入1mL羧甲基纤维素钠(CMC—Na)，另1支试管中加入1mL蒸馏水作为对照。将2支试管摇匀后，在电热恒温培养箱中40℃保温24h。采用

4、3，5一二硝基水杨酸比色法【12】，测定反应体系中还原糖的含量。以每小时生成lmg的还原糖作为1个酶活单位。1．3．4多聚半乳糖醛酸酶活性测定取2支试管．分别加入0．5mL酶液，然后在1支试管中加入0．5mL多聚半乳糖醛酸钠．另1支试管中加入0．5mL蒸馏水作为对照。将2支试管摇匀后，在电热恒温培养箱中40℃保温24h。采用3，5一二硝基水杨酸比色法f12】，测定反应体系中还原糖的含量。以每小时生成1mg的还原糖作为1个酶活单位。2结果与分析2．1不同温度对番茄花柄外植体脱落率的影响从图1可以看出，高温不同程度抑制了番茄离体花柄的脱落，其中25℃和3

5、0℃处理下的离体花柄培养墨h后开始脱落，至培养16h时25℃处理脱落率开始高于30℃处理，培养32h后，25℃处理脱落率显著高于30℃处理，而35℃处理一直到32h仍未发生脱落。说明在25℃以上的温度条件下，温度越高，越抑制番茄花柄外植体的脱落。2．2不同温度处理对番茄花柄外植体离区可溶性蛋白含量的影响”从图2可以看出．不同温度处理对番茄花柄外植体离区可溶性蛋白含量有一定影响，处理8h后，35℃处理可溶性蛋白含量高于30℃和25℃处理，但随处理时间延长，35℃处理的可溶性蛋白含量明显下降，而25℃和430℃处理间可溶性蛋白含量无明显差异，且随时间延长

6、变化不大。由此可推测，长时间亚高温可能使使外植体离区部位氧化或钝化，从而使可溶性蛋白含量降低。2．3不同温度处理对番茄花柄外植体离区纤维素酶活性的影响从图3可以看出，不同温度处理番茄外植体离区纤维素酶活性表现出明显差异，其中25℃和30qC处理的纤维素酶活性变化趋势相同，处理8h活性较高，处理16h都有所降低，至处理32h活性又升高，但30℃处理纤维素酶活性要比25℃处理稍高些。而35℃处理在处理8h与16h变化不大，处理32h则降低，且明显低于25℃万方数据．782．沈阳农业大学学报第38卷与30℃处理。说明在亚高温下，纤维素酶的活性降低。冰g薄g

7、犍‘§疆至《81632处理时间Time／}I图l不同温度对番茄外植体的脱落率的影响Figllre1Effect0fm仃erenttempe鞠tIlres伽theabscissionrate0ftoI眦topedicelexpIant图2不同温度对番茄外植体离区可溶性蛋白含量的影响FigIl耽2Effectofm骶renttempe咫tumsOnthe舳lubleproteincontentinab∞issiOnzoneoft锄at0pediceIexpl肌t2．4不同温度处理对番茄花柄外植体离区多聚半乳糖醛酸酶活性的影响从图4可以看出．在处理8h和1

8、6h时，各温度处理的多聚半乳糖醛酸酶活性相差不大。但处理32h时，25℃处理的多聚半乳糖醛酸酶活性显著高于3