温度对酶活性影响

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1、课题2温度对酶活性的影响课题概述：生物体内的各项代谢，只有在酶的参与下才能迅速进行。酶的本质是蛋白质，其催化作用受温度等条件的影响。不同类酶均有其作用的最适温度，高于或低于该温度，酶的活性就会下降，直至完全遭到破坏。过氧化氢酶双氧水对大多数生物体有害，而许多生物体内都有过氧化氢酶等来分解它。H2O2—————→H2O+O2本实验将以酵母菌为过氧化氢酶来源，利用氧气浓度传感器来测定不同温度下该反应的速度，从而确定过氧化氢酶发挥作用的最适温度。氧气浓度传感器可测定气体中0-27%范围的氧气的浓度。其核心装置是一原电池，氧气分子进入其中被还原而引起电流变化，即氧气浓度决定了电流

2、变化的大小，进而改变输出电压的大小。因此通过对输出电压的测定即可确定气体中氧气的浓度。目的：1．学会氧气浓度传感器的使用方法。2．学会测定不同温度下酶促反应的速率，并对各速率进行比较。器材：实验材料：市售干酵母。实验仪器及用品：TI—83Plus图形计算器及CBL系统、氧气浓度传感器(附配套塑料瓶)、玻璃棒、温度计、100mL小烧杯、50mL量筒、小试管、刻度移液管、胶头滴管、保温杯、蒸馏水洗瓶、冰、冷水、热水、吸水纸。实验试剂：3%H2O2溶液、2%葡萄糖。步骤：一．实验准备1．水浴准备：保温杯(或两个烧杯间填充泡沫塑料代替之)中盛放一定量冰水或热水，分别调至0—5℃、

3、20—25℃、30—35℃、35—40℃。实验期间温度计始终要悬在水中，监测温度。如有变化，及时调整。　　2．称取0.5g干酵母溶解在25mL2%葡萄糖溶液中，搅拌均匀。取4支小试管，各加入1mL上述悬浊液，分别置于各温度水浴中5—10分钟。二．设置传感器1．连接TI—83Plus图形计算器、CBL系统。2．将氧气浓度传感器与CBL系统CH1通道相连。3．打开TI—83Plus图形计算器、CBL系统，按APPS，选择“CHEMBIO”程序，按ENTER。(见图1、2)图1图24．在“MAINMENU”菜单中选择“1：SETUPPROBES”；输入传感器数量“1”，按ENT

4、ER。(见图3)5．在“SELECTPROBE”菜单中选择选择“7：MOREPROBES”，直至出现氧气浓度传感器。6．在“SELECTPROBE”菜单中选择“4：OXYGENSENSOR”。(见图4)图3图47．输入通道序号“1”；在“CALIBRATION”菜单中选择“1：USESTORE”。(见图5、6)图5图68．在“OXYGENUNITS”菜单中选择“1：PERCENT”。传感器设置完成后即返回“MAINMENU”菜单。(见图7、8)图7图8三．设置采样方式1．在“MAINMENU”菜单中选择“2：COLLECTDATA”。(见图9)2．在“COLLECTDAT

5、A”菜单中选择“2：TIMEGRAPH”，预热30秒后，按ENTER。(见图10)图9图103．输入采样间隔时间：“30”秒，按ENTER。输入采集数据点的点数：“16”个，按ENTER。屏幕显示该次采样共需历时480秒，按ENTER。(见图11、12)图11图124．在“CONTINUE”菜单中选择“1：USETIMESETUP”。(见图13)图135．输入Y轴(氧气百分含量)的最小值：“19.0”(%)，按ENTER。输入Y轴的最大值：“22.0”(%)，按ENTER。输入Y轴坐标点间隔：“0.5”，按ENTER。随后出现的屏幕上告知“按ENTER开始收集数据”。(见

6、图14、15)图14图15四．数据采集1．用移液管移取3mL3%H2O2溶液于氧气浓度传感器附带之塑料瓶中，再加入3mL蒸馏水后，放入35-40℃水浴中温育5分钟左右。2．用滴管滴加4滴35-40℃温度的干酵母葡萄糖溶液，略微震荡摇匀后塞上氧气浓度传感器，按ENTER开始收集数据。3．当CBL显示“DONE”时，采样全部完成(见图16)。按ENTER即可看到氧气浓度随时间变化曲线，按ENTER。4．在“REPEAT”菜单中选择“1：NO”。(见图17)图16图175．在“MAINMENU”菜单中选择“7：QUIT”。6．取出传感器，洗净塑料瓶，吸干水分。用风扇或纸扇对传感

7、器扇风一分钟左右以换气。五．数据存储1．在主界面中按2nd+[LIST]，在“NAMES”菜单中选择“1：L1”；按STOÞ；按ALPHA+[A]，按ENTER。此操作将L1数组中的数据存储到A数组中。(见图18、19)图18图192．在主界面中按2nd+[LIST]，在“NAMES”菜单中选择“2：L2”；按STOÞ；按ALPHA+[B]，按ENTER。此操作将L2数组中的数据存储到B数组中。(见图20、21)图20图21六．继续数据采集。1．按APPS，选择“CHEMBIO”程序，按ENTER。2．重复三、四、五的操作步骤