《不同方法hbx基因表达质粒转染肝癌hepg2细胞的效果比较-论文》

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1、第23卷第7期中国普通外科杂志Vo1．23No．72014年7月ChineseJoumalofGeneralSurgeryJu1．2014doi：1O．7659／j．issn．1005-6947．2014．07．014·基础研究·http：／／www．zpwz．net／CN／abstract／abstract3957．shtml不同方法HBx基因表达质粒转染肝癌HepG2细胞的效果比较任建军，孟兴凯，牛剑祥(内蒙古医科大学附属医院普通外科，内蒙古呼和浩特010059)摘要目的：比较Lipo2000、磷酸钙法和Lonza电转法转染乙型肝炎病毒x(HBx)基因

2、的表达质粒pHA．HBx至HepG2肝癌细胞的转染效率及其细胞毒性。方法：分别用Lipo2000、磷酸钙法和Lonza电转法将绿色荧光蛋白(GFP)标记的pHA．HBx转染至HepG2肝癌细胞，以荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率，RT．PCR鉴定HBx基因在HepG2细胞基因组的整合，AnnexinV／PI法检测细胞的存活情况。结果：RT-PCR结果显示，外源性HBx基因通过3种转染方法均可导入HepG2细胞并表达；Lipo2000和Lonza电转法的转染效率均高于磷酸钙法(均P<0．05)，而Lipo2000和Lonza电转法的转染效率间差异无统计学意

3、义(P>O．05)；细胞存活率从高到低依次为Lonza电转法、Lipo2000、磷酸钙法(均P<0．05)。结论：Lonza电转法转染pHA—HBx至HepG2肝癌细胞转染效率高，且细胞毒性小，是较好的转染方法。【中国普通外科杂志，2014，23(7)：936—940】关键词癌，肝细胞；乙型肝炎病毒X；转染中图分类号：R735．7ComparisonofdiferentmethodsforHBxgenetransfectionintoHepG2cellsPENJianjun，MENGXingkai，NIUJianxiang(DepartmentofGene

4、ralSurgery,AffiliatedHospital，InnerMongoliaMedicalUniversity,Hohhot010059，China)Correspondingauthor：NIUJianxiang,Email：dr_rjj@126．COWlABSTRACTObjective：TocomparethetransfectioneficiencyandcytotoxicityamongLipo2000reagent，calciumphosphatemethod，andLonzaelectroporationintransfection

5、ofhepatitisBvirusX(HBx)geneexpressionplasmid(pHA—HBx)intotheHepG2cells．Methods：Greenfluorescentprotein(GFP)一taggedpHA—HBxwastransfectedintotheHepG2cellsbyLipo2000reagent，calciumphosphatemethod,andLonzaelectroporation—baseddeliver~respectively~hen,the基金项目：内蒙古医学院2011科技百万工程资助项目(NY201

6、lbw004)；内蒙古卫生厅医疗卫生科研计划资助项目(2010038)；内蒙古医学院外科博士点立项建设一般资助项目(NYFYzDBJ201o003)；内蒙古自治区高等学校科学研究资助项目(NJZY13416)。收稿日期：2014—04—21；修订日期：2014—06—09。作者简介：任建军，内蒙古医科大学附属医院副主任医师，主要从事肝、胆、胰疾病诊治方面的研究。通信作者：牛剑祥，Email：dr_rjj@126．corn@皈权扫中国普通外科杂志所有936http：／／www．zpwz．net第7期任建军，等：不同方法HBx基因表达质粒转染肝癌HepG2细胞

7、的效果比较937transfectionefficiencywasdeterminedbyflowc~ometryandfluorescencemicroscopy,theHBxgeneintegrationintothegenomeoftheHepG2cellswasidentifiedbyRT-PCRmethod,andthecellsurvivalstatuswasexaminedandanalyzedbyAnnexinv／PIstainingJrespectively．ResMts：RT-PCRresultsindicatedthatexogeno

8、usHBxgenewasintegratedintothegeno