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1、·22·中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology2004,20(1):22-26[文章编号]1000-4718(2004)01-0022-05大鼠主要水溶性晶体蛋白在老化进程中的时相变化12李闻捷,Joseph-FuS-C(12第二军医大学长海医院中心实验室,上海200433;美国新泽西医学院生物化学及分子生物学系,纽瓦克07103)[摘 要] 目的:研究大鼠老化进程中主要晶体蛋白相对含量的时相变化与晶体老化的关系。方法:常规饲养不同年龄SD大鼠(出生后1d、8d、2周、8周、8个月及1.5年);提取水溶性晶体蛋白,双向电泳(等电聚焦/SDS-
2、聚丙烯酰胺凝胶电泳,IEF/SDS-PAGE)得到大鼠晶体蛋白电泳图形;考马斯亮蓝染色后扫描蛋白图形,分别确认各主要晶体蛋白组分并测定其相对含量百分比组成。结果:(1)所测各组大鼠18种主要晶体蛋白组分中,7种晶体蛋白相对含量呈渐进性时相改变,但总水溶性晶体蛋白水平未见明显变化。(2)晶体蛋白相对含量时相改变主要有4种形式:升高(βB4、αB2、αA2、βA1)、降低(β7、β8、γ2,3、γ5,6)、大致保持稳定(βA3、βB5)及无规则性改变。(3)晶体蛋白βB4/αA2比值在大鼠老化进程中呈渐进性升高。结论:晶体蛋白相对含量的渐进性时相改变反映晶状体老化的程度。[关键词]晶体蛋
3、白类;大鼠;衰老[中图分类号]R363[文献标识码]A 晶状体的功能是将光线聚集到视网膜上,产生-Rad公司;其余试剂均购自Sigma公司。视觉;而晶体蛋白的组成、结构和它们彼此之间的相互关系则是维持晶状体透明性的分子基础。晶体蛋白的有序排列维持晶状体的空间结构,如果晶体蛋白组成发生改变,则会影响、破坏此种正常结构,使晶状体透明性受到破坏、丧失而致白内障。研究表明,许多物理、化学因素可影响晶状体的蛋白质结构,诱发白内障;而人类的自然老化过程则是白内障[1,2]发生最常见的原因。随着年龄的增长,晶状体老化是一种不可逆的过程。在白内障形成的早期,由于没有明显的疼痛或视力障碍,大多数人并
4、未意识到白内障正在发生。随着近年来抗老化医学的兴起,探讨、分析人类及其它哺乳动物在老化进程中晶Fig1(A)Two-dimensionalelectrophoretogram(IEF/SDS-体蛋白变化的规律,有助于分析晶状体老化的程度,PAGE)preparedwith70μgsolublelensproteinfroman8-进而为延缓晶状体老化及探讨白内障发病机理提供week-old,control-fed,maleSDrat,and(B)schematic有益的资料。本文拟以常规饲养SD大鼠作为研究distributionmapof(A).Majorpolypeptidesa
5、relabeledus2模型,分别测定大鼠老化进程中6个年龄组(出生1ingtheconventionalalphanumericsystem;Secondarygene[3]productsaredesignatedbynumber.Photomicrographsfromd到1.5年)主要晶体蛋白变化的数据,并按文献Joseph-FuS.-C.ExpEyeRes.1990,51(1):79-85.编码方式(图1)命名主要晶体蛋白组分,分析其相对图1(A)上图:8周龄雄性SD大鼠双向电泳图谱(70μg水含量变化规律,探讨用两种主要晶体蛋白βB4/αA2比溶性蛋白样品)值的渐进性改变
6、反映大鼠晶状体老化的进程。(B)下图:双向电泳图谱(A)的示意图及编码,其主要材 料 和 方 法蛋白斑点用英文字母和数字标注,而衍生修饰产物斑点仅用数字表示1 试剂2 实验仪器两性载体(ampholinepH3.5-10.0)购自Pharma2扫描系统采用图像密度仪[Videodensitometer,应cy公司;丙烯酰胺(acrylamide)、N,N’-甲叉双丙烯用软件为Bio-scannerVGA(1)CameraHi-Res2-D酰胺(bisacrylamide)、疏水膜(polyvinylidenedifuoride,Scanning,(2)Hi-ResView&Proce
7、ss2-DDataPVDF)及电泳蛋白标准(商品号:161-0367)购自BioZeineh,美国];等电聚焦采用多用电泳仪(Multiphor[收稿日期]2002-09-10[修回日期]2002-11-25II,LKB公司,瑞典);SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳·23·(SDS-PAGE)采用微量蛋白分析系统(MiniProtein3电聚焦的标准品及第二项SDS-PAGE电泳标准品System,Bio-Rad公司,美国)。进行比较,确定不同晶体蛋白组分的等电
