神经节苷脂的高效液相色谱-化学衍生方法进展

《神经节苷脂的高效液相色谱-化学衍生方法进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、神经节苷脂的高效液相色谱-化学衍生方法进展徐桂芸常理文（中国科学院化学研究所北京100080）使定量的误差较大。而且分离效率和检测灵敏度远1前言远满足不了一些低含量和复杂体系生物样品的分析要求。为了提高检测的灵敏度和改善分离效率，高效神经节苷脂（Ganglioside）是一类含有唾液酸液相色谱HPLC）技术已被应用到神经节苷脂的分Sialicacid）的酸性鞘氨醇糖脂，由鞘氨醇Sphingo-析上。本文就这方面作一简介。sine、脂肪酸、寡糖链三部分组成。它采用Sven-nerhnolm的通俗命名法，例如GM4GD1GT1b和2神经节苷脂的高效液相色谱分离GQ1b等。其中，G代表神经节苷

2、脂；大写MDTQ（1HPLC对高沸点、不挥发性化合物是一个非和P分别表示所含的15个唾液酸基团；阿拉伯数常有效的分离和检测手段。成功的分离神经节苷脂字14分别代表除唾液酸外从4个糖残基到1个首先是在硅胶的正相色谱上进行的2229。通常用氯糖残基的糖链；小写字母ab等表示唾液酸连接不仿-甲醇-水或者异丙醇-正己烷-水体系作流动相，神同的位置。经节苷脂按其含糖残基的数目完全分开。其流出顺神经节苷脂广泛分布于动物的各种组织细胞膜序是随着糖残基的增加而保留时间增长。图1是神上，有着多种生物学功能，其中包括表面受体作经节苷脂的对溴苯甲酰甲基酯在硅胶柱上的分离谱用〔23、细胞识别与粘合作用〔4〕、细

3、胞生长及分化图〔32。从图1可以看到在含有相同数目唾液酸残基的调节作用〔89，并且也是与肿瘤相关的糖脂抗的GM4GM3GM2和GM1中，糖链最短的GM4先原〔11〕。因此有关神经苷脂的各种研究一直很活被洗脱下来，最后流出的是糖链最长的GM1。GDa跃。自然，对于它的分离纯化、结构和定量分析的方和GM1含有相同数目（4个）糖的残基。而在GDla的法学也得到迅速发展。应用薄层色谱（TLC）法分析分子中所含两个唾液酸的羧基被酯化，使它带上两神经节苷脂是比较成熟的技术〔11〕。常用含石膏的个疏水的苯环，从而它的极性变得比GM的衍生物硅胶色谱板，使用氯仿-甲醇-水体系作为展开剂，显要弱，所以它在G

4、M1的前面流出。色剂为间苯二酚-盐酸混合液，在580nm处经光密（꠲2┯捎谏窬궽谲罩겵囊欢耸乔姿꺵奶橇矗곁度薄层扫描仪进行定量〔2021。由于各条谱带显色反端是疏水的脂肪链，所以反相色谱技术更适合于对应完全程度的不同以及板与板之间质量上的差异，本文收稿日期：1994年3月12日，修回日期1994年4月26日它的分离一些实验室〔눳〕使用十八烷基或辛基键装置的发展，使HPLC成为分离神经节苷脂的混合合硅胶柱，甲醇-水作为流动相，神经节苷脂按其含物和异构体的有效技术。Jiaden的实验室首先应唾液酸基数目的差异得以分离。图2是人脑中混合用HPLC分离未进行衍生化的神经节苷脂。检测是神经节苷脂的

5、对硝基苄基肟在十八烷基键合相柱上在移动丝火焰离子化检测器上进行的。但这种检测的分离谱图〔눳。首先流出的是样品中含唾液酸基最器与HPLC匹配不是十分适宜的，尚未能普遍采多的GT1b3个，其次是含两个唾液酸基的GD1b，用。有一些实验室在硅胶柱或离子交换柱上直接分GDla最后被洗脱下来的是含1个唾液酸基的离神经节苷脂，定量是在薄层板上经光密度扫描来GM1。GD1a和GD1b是含相同数目的唾液酸基和相同完成的23HPLC常用的检测器是紫外和荧数目的糖残基（4个）。它们的差异只是唾液酸在糖光检测器，它们具有选择性好，灵敏度高的特点。神链上连接位置的不同。图中的峰3和4分别为GDa经节苷脂有微弱的

6、紫外吸收，直接在195～215nm和GM1的异构体（原文作者没有指出为何种异构处测定，其紫外吸收峰灵敏度较低〔31，갳34，갳81〕，一般为体）。反相柱不但可以分辨出相差一个糖残基的神经nmol甚至mmol级水平。为了解决检测问题，发展节苷脂，而且对于唾液酸在糖残基连接位置不同的了柱前化学衍生化方法，就是说在柱前将样品制备神经节苷脂以及其它异构体也有高的分辨率。成各种衍生物，而这些衍生物或者有荧光或者对紫外敏感，以达到痕量检测的目的。1）全苯甲酰化反应是用苯甲酰氯与神经节苷脂在密封的微型反应器中进行。在37下保温1～24小时，各种神经节苷脂都能完全衍生化〔눲〕场。糖链上所有的羟基和氨基全

7、部被苯甲酰化。由于这种衍生物含有多个苯甲酰基，故在紫外检测器上有高的响应值，其检测灵敏度可达pmol水平。McCluer等人〔42〕首先采用这种衍生技术分析中性糖鞘脂。Lee〔〕澈和Ullman应用这种方法，将样品中的中性和酸性糖鞘脂同时进行苯甲酰化，然后用HPLC进行分离和定量分析。值得注意的是在反应前，必须将样品、苯甲酰氯、吡介质以及所用的玻璃器皿进行3神神经节苷脂的结构特点是在它的寡糖链上充分干燥。结合一个或几个唾液酸基团。沿