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《不同酶抑制剂检测金属β_内酰胺酶的比较和改进.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、432临床检验杂志2004年第22卷第6期ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience,2004,Vol22,No6文章编号:1001764X(2004)06043203中图分类号:R4465文献标识码:A论著不同酶抑制剂检测金属内酰胺酶的比较和改进王卫萍,邵海枫,李珍大,张小卫(南京军区南京总医院检验科,南京210002)摘要:目的通过比较氯化铜(CuCl2)、氯化铁(FeCl3)、乙二胺四乙酸(EDTA)、巯基乙醇和2巯基丙酸五种不同化合物对金属内酰胺酶
2、(metallolactamase,MBL)的抑制作用,建立一种检测MBL的简便方法。方法用头孢他啶(CAZ)作为指示药物,在相邻的纸片上加抑制剂,评估出抑制作用最强的MBL抑制剂。再对抑制剂浓度和两纸片间的距离进行条件优化。用建立的方法检测临床分离的86株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)MBL的产生率和对10种抗菌药物的耐药率。结果2巯基丙酸对MBL抑制作用最强,将其作110稀释后,2巯基丙酸自身的抑菌环消失,与CAZ纸片相距15~20mm时,结果最易观察。86株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中9
3、株产MBL,无论是否产MBL,均对被检测的10种抗菌药物有极高的耐药率。结论2巯基丙酸和头孢他啶双纸片协同试验是一种简便、敏感的检测产MBL细菌方法,耐亚胺培南的铜绿假单胞菌往往多重耐药。关键词:金属内酰胺酶;2巯基丙酸;铜绿假单孢菌;耐药性内酰胺酶种类繁多,现公认的分类方案有胸水7株,腹水7株,痰59株。Ambler分子生物学分类法和Bush的表型分类法。1.3MBL抑制剂CuCl2、FeCl3(分析纯,南京化学按分子生物学分类,可以分为A~D4类。除B类试剂厂),乙二胺四乙酸(EDTA,Promega公司),巯基外,
4、其他三类的活性位点均为丝氨酸残基。B类酶乙醇和2巯基丙酸(Sigma公司)。2+2+激活需要金属离子Zn作辅因子,而Zn能被金属1.4培养基与药敏纸片MH琼脂和环丙沙星螯合剂螯合,故简称金属内酰胺酶(metallo(CIP)、阿米卡星(AK)、氨曲南(ATM)、哌拉西林lactamase,MBL)。这类酶不被内酰胺酶抑制剂(PRL)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、头孢吡肟克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦抑制,对内酰胺酶抗(FEP)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、头孢哌酮/舒巴生素具有广泛水解作用,产此酶的细菌可对
5、内酰坦(SCF)、亚胺培南(IPM)10种药敏纸片均为英国胺类的所有抗生素包括青霉素类、头孢菌素类、碳青Oxoid公司产品。[1]酶烯类等产生耐药,给临床治疗带来很大的困难。1.5细菌培养、鉴定和药敏试验分离菌用Vitek尤其是获得性MBL基因可通过质粒、整合子等水平32微生物鉴定系统鉴定,用KB法进行药敏试验。扩散,大大增强了播散能力及对临床的威胁强度。1.6MBL抑制剂选择将质控菌株制成0.5麦氏我们通过分析几种不同螯合剂对MBL的抑制作用,浊度的菌悬液。在MH平板上涂布受试细菌,每块探讨并建立一种筛选产MBL细菌的简便方法,
6、了解平板贴2张CAZ纸片(30g/片)和1张空白纸片,2产MBL细菌的耐药性,为临床治疗提供理论依据。张CAZ纸片相距40~50mm,空白纸片与其中一个1材料与方法CAZ纸片位于一侧,与CAZ纸片之间选择10、15、201.1质控菌株产金属酶株:IMP1型(高活性)、mm三种不同距离(两纸片中心之间距离),空白纸IMP4型(中等活性)、IMP9型(低活性)铜绿假单胞片上分别滴加0.5mol/LCuCl25l,0.5mol/LFeCl3菌(浙江大学医学院附属第一医院传染科俞云松教5l,0.5mol/LEDTA5l,巯基乙醇和
7、2巯基丙酸授惠赠);产AmpC酶株:质粒MIR1型肺炎克雷伯原液2.5l,15稀释2巯基丙酸2.5l,110稀释菌(Klebsiellapneumoniae)(解放军第117医院检验科的2巯基丙酸2.5l,35!孵育18h。观察不同浓孙长贵主任惠赠)、染色体型阴沟肠杆菌度不同抑制剂与头孢他啶协同检测MBL的效果。(Enterobactercloacae)ED029M;产ESBLs株Klebsiella1.7MBL检测试验空白纸片和CAZ纸片相距20pneumoniaeATCC700603。mm,在空白纸片上加110稀释2巯
8、基丙酸2.5l,1.2实验菌株本院临床分离的耐亚胺培南铜绿35!孵育18h。若2巯基丙酸旁边的CAZ纸片出假单胞菌86株,分离自尿4株,血4株,脓汁5株,现
