几种不同dna聚合酶比较

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1、合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TaqDNA聚合酶存在于水生嗜热菌(Thermusaquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。这个酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性，缺少3′→5′的外切酶活性，即具有5’-3’DNA聚合酶活性和对双链DNA特异的5’-3’外切核酸

2、酶活性，无3’-5’外切酶活性。使用该产品扩增得到的PCR产物的3’末端附有一个“A”碱基，可直接用于TA克隆。由于不具有3'-5'外切酶活性，因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。TaqDNA聚合酶还具有非模板依赖性活性，可将PCR双链产物的每一条链3'加入单核苷酸尾，故可使PCR产物具有3'突出的单A核苷酸尾；另一方面，在仅有dTTP存在时，它可将平端的质粒的3'端加入单T核苷酸尾，产生3'端突出的单T核苷酸尾。应用这一特性，可实现PCR产物的T-A克隆法。适用于：普通PCR，TA克隆SuperTaqDNA聚合酶SuperTaqDNA聚合酶是由耐热的TaqDNA聚合酶和具有3’-5

3、’外切酶活性的高保真DNA聚合酶按照最合适的比例混合而成，具有扩增效率高和错配率低的优良性能，使用该产品扩增得到的PCR产物的3’末端附有一个“A”碱基，可直接用于TA克隆。适用于：要求效率高保真性好的PCR反应。UlltraPF™DNA聚合酶UlltraPF™DNAPolymerase是一种耐热的超保真DNA聚合酶，具有5’-3’聚合酶活性和3’-5’外切酶活性，具有比PfuDNAPolymerase更好的保真性能和更快的扩增效率。使用该产品扩增得到的PCR产物为平滑末端，可直接克隆于平滑末端载体中。LATaqDNA聚合酶LATaqDNApolymerase是一种具有5'-3’DNA聚合酶

4、活性和3'-5'校对活性的聚合酶，可用于扩增较长的富含GC的片段。作为具有3'-5'校对活性的且热稳定性最强的DNA聚合酶之一，该酶可在最佳温度（75℃）催化DNA合成，且错配率低（准确率约是标准TaqDNApolymerase的10倍）。该酶可扩增人基因组DNA长达17.5kb的片段和λDNA长达20kb的片段。在较长的PCR扩增中应用LAproTaqDNApolymerase可减少拖尾效应，实际上减少背景影响。LATaqDNApolymerase扩增产物带有A尾可用于T-A克隆。LATaqDNA聚合酶的应用：LATaqDNApolymerase可应用于许多方面：扩增人基因组中长达20kb

5、的片段；高忠实度扩增；比普通Taq聚合酶更稳定；T-A克隆；定点突变；片段分析。TthDNA聚合酶TthDNA聚合酶是一种热稳定性酶，分子量为92kDa，从ThermusthermophilusHB-8中分离。该酶在74℃时可进行DNA复制，在95℃的半衰期为20分钟。TthDNA聚合酶在镁离子存在的条件下可催化核苷酸沿5'—3'方向发生聚合反应，形成双链DNA，也可在镁离子存在的条件下，以RNA为模板沿5'—3'方向发生核苷酸聚合反应。该酶也具有5'－3'外切酶活力。TthDNA聚合酶可用于PCR、RT-PCR、逆转录和较高温度条件下的引物延伸反应。产品特点：1、RT-PCR反应的特异性增

6、加：在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性2、二级结构减少：在较高的温度下进行逆转录，减少了由于RNA二级结构引起的问题3、当加入Mg2+后，该酶的聚合活性大大增加，从而使cDNA合成与扩增可用一种酶催化。生产公司：美国promage公司PfuDNA聚合酶该酶在75℃时可进行DNA复制，PfuDNA聚合酶在镁存在的条件下可催化核苷酸沿5’→3’方向发生聚合反应，形成双链DNA，PfuDNA聚合酶具有3’→5’外切酶校正活性。当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。在所有热稳定性聚合酶中PfuDNA聚合酶的错误几率最低，错误率约为1×10-6/每碱基对，缺

7、点是PCR扩增灵敏度较Taq低。建议PfuDNA聚合酶用于要求保真度比较高的PCR反应，引物的延伸反应以及其它的一些应用，包括克隆、DNA表达、突变分析等。PfuDNA聚合酶产生的PCR产物为平端，无末端磷酸化。若要进行“T-A”克隆，可在PCR反应完了之后，加入TaqDNA聚合酶，于72℃反应1-2小时，以便在DNA3’端附加一个“A”。GenStarPfuDNAPolymerase是将克隆有Pyrococ