重组人干扰素α2b栓(新增)

重组人干扰素α2b栓(新增)

ID:38198451

大小:50.50 KB

页数:4页

时间:2019-05-28

重组人干扰素α2b栓(新增)_第1页
重组人干扰素α2b栓(新增)_第2页
重组人干扰素α2b栓(新增)_第3页
重组人干扰素α2b栓(新增)_第4页
资源描述:

《重组人干扰素α2b栓(新增)》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库

1、重组人干扰素a2b栓ChongzuRenGanraosua2bShuanRecombinantHumanInterferona2bVaginalSuppository本品系由高效表达人干扰素a2b基因的大肠杆菌,经发酵、分离和纯化后,加入栓剂基质中,经成型、挂膜制成。1.基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2.制造2.1工程菌菌种2.1.1名称及来源重组人干扰素a2b工程菌株系由人干扰素a2b基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。2.1.2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。2.1.3菌种检定种子批和工作种子批的菌种应进行以下各

2、项全面检定。2.1.3.1划种LB琼脂平板应呈典型的大肠杆菌集落形态,无其他杂菌生长。2.1.3.2染色镜检应为典型的革兰阴性杆菌。2.1.3.3对抗生素的抗性应与原始菌种相符。2.1.3.4电镜检查(工作种子批可免做)应为典型的大肠杆菌形态,无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。2.1.3.5生化反应应符合大肠杆菌生物学性状。2.1.3.6干扰素表达量在摇床中培养,应不低于原始菌种的表达量。2.1.3.7表达的干扰素型别应用抗a2b型干扰素参考血清作中和试验,证明型别无误。2.1.3.8质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。2.1.3.9目的基因核苷酸序列检查(工作种子批可免做)目的

3、基因核苷酸序列应与批准序列相符。2.2原液2.2.1种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基(可含适量抗生素)中培养,供发酵罐使用。2.2.2发酵用培养基采用适宜的不含任何抗生素的培养基。2.2.3种子液接种及发酵培养在灭菌培养基中接种适量种子液。在适宜温度下进行发酵,应采用经批准的发酵工艺,并确定相应的发酵条件,如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查(附录ⅨG)。2.2.4发酵液处理用适宜的方法收集处理菌体。2.2.5初步纯化采用经批准的纯化工艺进行初步纯化,使其纯度达到规定的要求。2.2.6高度纯化经初步纯化后,采用经批准的工艺进行高度纯化,使

4、其达到3.1项要求,即为人干扰素a2b原液。加入适宜稳定剂,除菌过滤后保存于适宜温度,并规定其有效期。2.2.7原液检定按3.1项进行。2.3栓剂制备2.3.1配制按经批准的配方进行配制。将干扰素原液与基质分别平衡至37℃,混合均匀。采用的基质应符合附录ⅠB的有关规定。2.3.2栓剂成型按经批准的生产工艺进行。栓剂外形应完整光滑,并应有适宜的硬度,以免在包装或贮藏时变形。2.4成品2.4.1分批应符合“生物制品分批规程”规定。2.4.2规格应为经批准的规格。2.4.3包装应符合“生物制品包装规程”和附录ⅠB的有关规定。3检定3.1原液检定3.1.1生物学活性依法测定(附录ⅩC)。3.1.2蛋白

5、质含量依法测定(附录ⅥB第二法)。3.1.3比活性为生物学活性与蛋白质含量之比,每1mg蛋白质应不低于1.0×108IU。3.1.4纯度3.1.4.1电泳法依法测定(附录ⅣC)。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分离胶胶浓度为15%,加样量应不低于10μg(考马斯亮蓝R250染色法)或5μg(银染法)。经扫描仪扫描,纯度应不低于95.0%。3.1.4.2高效液相色谱法依法测定(附录ⅢB)。色谱柱以适合分离分子质量为5-60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂;流动相为0.1mol/L磷酸盐—0.1mol/L氯化钠缓冲液,pH7.0;上样量应不低于20μg,于波长280nm处检测,以干扰素色谱峰

6、计算理论板数,应不低于1000;按面积归一化法计算,干扰素主峰面积应不低于总面积的95.0%。3.1.5分子量依法测定(附录ⅣC)。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分离胶胶浓度为15%,加样量应不低于1.0mg,分子质量应为19.2kD±1.92kD。3.1.6外源性DNA残留量每1支应不高于10ng每100μg蛋白质应不高于10ng(附录ⅨB)。3.1.7鼠IgG残留量如采用单克隆抗体亲和色谱法纯化,应进行本项检定。每1支鼠IgG残留量应不高于100ng每1μg蛋白质应不高于10ng(附录ⅨL)。3.1.8宿主菌蛋白残留量应不高于总蛋白质的0.10%(附录ⅨC)。3.1.9残余抗生素活

7、性依法测定(附录ⅨA),不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。3.1.10等电点主区带应为4.0~6.7,供试品的等电点与对照品的等电点图谱一致(附录ⅣD)。3.1.11紫外光谱扫描用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至约100μg/ml~500μg/ml,在光路1cm、波长230nm~360nm下进行扫描,最大吸收峰波长应为278±3nm(附录ⅡA)。3.1.12肽图(至少每半年测定一次)依法测定(附

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。