重组人干扰素α2b栓(新增)

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1、重组人干扰素a2b栓ChongzuRenGanraosua2bShuanRecombinantHumanInterferona2bVaginalSuppository本品系由高效表达人干扰素a2b基因的大肠杆菌，经发酵、分离和纯化后，加入栓剂基质中，经成型、挂膜制成。1．基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2．制造2.1工程菌菌种2.1.1名称及来源重组人干扰素a2b工程菌株系由人干扰素a2b基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。2.1.2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。2.1.3菌种检定种子批和工作种子批的菌种应进行以下各

2、项全面检定。2.1.3.1划种LB琼脂平板应呈典型的大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。2.1.3.2染色镜检应为典型的革兰阴性杆菌。2.1.3.3对抗生素的抗性应与原始菌种相符。2.1.3.4电镜检查（工作种子批可免做）应为典型的大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。2.1.3.5生化反应应符合大肠杆菌生物学性状。2.1.3.6干扰素表达量在摇床中培养,应不低于原始菌种的表达量。2.1.3.7表达的干扰素型别应用抗a2b型干扰素参考血清作中和试验，证明型别无误。2.1.3.8质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。2.1.3.9目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）目的

3、基因核苷酸序列应与批准序列相符。2.2原液2.2.1种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐使用。2.2.2发酵用培养基采用适宜的不含任何抗生素的培养基。2.2.3种子液接种及发酵培养在灭菌培养基中接种适量种子液。在适宜温度下进行发酵，应采用经批准的发酵工艺，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（附录ⅨG）。2.2.4发酵液处理用适宜的方法收集处理菌体。2.2.5初步纯化采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。2.2.6高度纯化经初步纯化后，采用经批准的工艺进行高度纯化，使

4、其达到3.1项要求，即为人干扰素a2b原液。加入适宜稳定剂，除菌过滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。2.2.7原液检定按3.1项进行。2.3栓剂制备2.3.1配制按经批准的配方进行配制。将干扰素原液与基质分别平衡至37℃，混合均匀。采用的基质应符合附录ⅠB的有关规定。2.3.2栓剂成型按经批准的生产工艺进行。栓剂外形应完整光滑，并应有适宜的硬度，以免在包装或贮藏时变形。2.4成品2.4.1分批应符合“生物制品分批规程”规定。2.4.2规格应为经批准的规格。2.4.3包装应符合“生物制品包装规程”和附录ⅠB的有关规定。3检定3.1原液检定3.1.1生物学活性依法测定（附录ⅩC）。3.1.2蛋白

5、质含量依法测定（附录ⅥB第二法）。3.1.3比活性为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg蛋白质应不低于1.0×108IU。3.1.4纯度3.1.4.1电泳法依法测定（附录ⅣC）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg(考马斯亮蓝R250染色法)或5μg（银染法）。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0%。3.1.4.2高效液相色谱法依法测定（附录ⅢB）。色谱柱以适合分离分子质量为5-60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.1mol/L磷酸盐—0.1mol/L氯化钠缓冲液，pH7.0；上样量应不低于20μg，于波长280nm处检测，以干扰素色谱峰

6、计算理论板数，应不低于1000；按面积归一化法计算，干扰素主峰面积应不低于总面积的95.0%。3.1.5分子量依法测定（附录ⅣC）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0mg，分子质量应为19.2kD±1.92kD。3.1.6外源性DNA残留量每1支应不高于10ng每100μg蛋白质应不高于10ng（附录ⅨB）。3.1.7鼠IgG残留量如采用单克隆抗体亲和色谱法纯化，应进行本项检定。每1支鼠IgG残留量应不高于100ng每1μg蛋白质应不高于10ng（附录ⅨL）。3.1.8宿主菌蛋白残留量应不高于总蛋白质的0.10%（附录ⅨC）。3.1.9残余抗生素活

7、性依法测定（附录ⅨA），不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。3.1.10等电点主区带应为4.0～6.7,供试品的等电点与对照品的等电点图谱一致（附录ⅣD）。3.1.11紫外光谱扫描用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至约100μg/ml～500μg/ml，在光路1cm、波长230nm～360nm下进行扫描，最大吸收峰波长应为278±3nm（附录ⅡA）。3.1.12肽图(至少每半年测定一次)依法测定（附