酵母核糖核酸的提取及其含量的测定

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1、11卷3期龙岩师专学报1993年8月酵母核搪核酸的提取及其含量的测定何立芳陈旭超:,摘要本文报道了用浓盐法提取利用味精生产中的废水制得饲料酵母中的核糖核酸并利用,,,,721分光光度汁对其纯度及含量进行测定结果表明核糖核酸的纯度达72%提取率达6%若加以治理和综合利用,不但可减少污染,还可变废为利。:浓、、关键词盐法核糖核酸酵母一、引言,需,、。,在味精生产过程中耗大量烧碱纯酸盐碱废液污染问题相当严重该废液的各项指标大大超过国家容许最高排放浓度。,味精厂,近几年来已将其废液利用来生产饲料酵母本文对其酵,

2、。母中核糖核酸的提取及纯度测定进行一些探讨酵母,,,。体核糖核酸包含在酵母细胞内大都和蛋白质结合成核蛋白不易从细胞壁中渗出提取,.,核酸首先要破坏酵母细胞壁方能使核蛋白自细胞壁渗出破坏细胞壁的方法很多本文是用物理化学方法的浓盐法来提取核糖核酸。此法操作方便,成本低。浓盐法提取核酸是基于改变酵,,,母细胞的渗透压使细胞自身破裂而释放出核酸再利用等电点沉淀法原理调节PH值至核糖..,:。2、,。核酸的等电点(PH2一5)使核糖核酸沉淀进而分离洗涤干燥即得核糖核酸粗制品二、实验部分:(一)核糖核酸提取,,.冷

3、至室将一定量的醉母液中加入食盐使其浓度达10%然后在沸水浴加热提取一小时,,,,,,,温离心分离取出上清液置于冰浴内冷却待冷却至10℃以下时滴入6NHCL并不断搅拌..,,,尸2,调节H至0~25随后继续于冰浴中静置十分钟使核糖核酸充分沉淀离心分离所得沉,.淀用95呱乙醇洗涤三次然后转入80℃烘干:(二)核糖核酸纯度测定(定磷法)、:l试剂配制.,,:¹磷酸盐标准溶液准确称取磷酸二氢钾04389克用蒸馏水定容至l。俪l使用时再稀释10。0倍:º定磷试剂.6N::25:1:2::硫酸水%铂酸按10%抗坏血

4、酸一11:»铝酸按过氯酸溶液—.,‘193毫升蒸馏水中称入铝酸按05克再加70%过氯酸7,l摇匀即得9511卷3期龙岩师专学报1993年8月,.目.‘如....,......曰...........曰1........曰......2、:磷标准曲线的制作,按表1次序在各试管内加入不同量的10微克/毫升的磷标准溶液和试剂充分摇均后于,45℃水浴保很20分钟在721分光光度计上测OD值(波长660毫微米)表1含磷t对吸光度的影响管号10微克/毫升标准含磷量水定磷操口刀磷酸溶液(毫升)(微克)(毫升)试剂作(

5、660毫微米)‘…0033.045℃0。。.2!0552:0021553水浴31.0l02.03。0恒温0.3934l。5l51.53.0200.58552.0201.03,0分钟0.79662.5250。53.00。959,。以各管的磷含量作横坐标OD“0值为纵坐标作出标准曲线吸光度0.4090.0110.255一。]o·491520微克、:3核酸含量测定含磷量准确称取核酸样品。.1克干50毫升小烧杯中,加入5一6%氨水溶解,然后定容于50毫升的,。容量瓶中备用以测总磷和无机磷,,,吸此溶液Zml于定

6、氮瓶中加入3,n11ON硫酸4滴浓硝酸置电炉上灼烧消化至无色透明为止.冷却,移至0,。5毫升容量瓶定容待测总磷,,,另取1支10毫升离心管吸取样品2毫升加8毫升钥酸按)一过氯酸溶液放冰箱中半小时后取出离心,待测无机磷。,,,。,取3支15毫升试管1支作空白取水3毫升定磷试剂3毫升l支取水1毫升取总磷液,。,,。2毫升定磷试剂3毫升另一支取水l毫升取无机磷上层清液2毫升定磷试剂3毫升将39611卷3期龙岩师专学报1993年8月,,支试管一起置于45℃水浴上保温20分钟冷却后在660毫微米测定光密度根据测得

7、的光密度于标准曲线上查得相应的微克数。:计算公式总磷%-查是鱼“馨青鳌半豁0%无机磷%一义‘继鬓檐锐豁鱼0%含量%一(总磷%一无机磷%)丫弊O110.49又625一0.25义125340含量%-.56.~71%601又103l(测得无机磷“O毫微米OD~0.01总磷660毫微米OD一0.409查得相应无机磷微克数0.二25微克总磷微克数~10.49微克)三、讨论,,¹从测定结果表明在酵母液中所提取的核糖核酸的纯度还是较高的提取率达6%如何使味,,精生产中的废水得到综合利用还有待于进一步探讨味精废液中的菌

8、体含有蛋白质核酸等物,,,质其中含核糖核酸量较高一般为7~10%废液经高速离心机分离后的菌体可以提取四种‘’,、、、。S单核昔酸即腺昔酸(AMP)乌昔酸(GMP)胞昔酸(C材尸)尿昔酸(vMP)如果进一—,,步提取还可得到AT尸等贵重药物其中乌昔酸(GMP)具有香草味道还可以作为强烈味精的助鲜剂。,。,,;º用浓盐法提取核糖核酸时盐的浓度是关键过低核糖核酸不易从细胞内渗出过高细胞急剧收缩也不利于抽提。经实验表明,盐的浓度控制在10呱为最佳。