生工一班 木聚糖酶的固定化

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1、酶工程试验木聚糖酶的固定化试验生工一班第三组组长：王立波组员：何凤冯悦靳晓红张雯惠刘丽君宁祎刘亿周晓萌木聚糖酶的固定化实验目的：掌握酶的固定化的方法和原理掌握固定化酶酶学性质的研究方法实验原理酶的固定化是指用物理或化学方法处理水溶性的酶使之变成不溶于水或固定与固相载体的但具有酶活性的酶衍生物。在催化反应中，它以固相状态作用于底物。反应完成后，容易与水溶性底物分离，可反复使用，固定化酶不但具有酶的高度专一性和高催化效率的特点，且比水溶性酶稳定，可较长期使用，具有较高的使用价值。将酶制成固定化酶，作为生物体内的酶的模拟，可有助于了解微环境对酶功能的影响。酶的固定化方

2、法一般有以下几种：载体结合法（最常用共价结合法），交联法，包埋法，酶经过固定化后，比较能耐受温度和PH的变化，最适PH往往稍有位移，对底物专一性没有改变，实际使用效率提高十几倍，甚至几百倍。材料与方法：材料黑曲霉仪器752型分光光度计，水浴锅，电炉，电子天平，干燥箱，抽滤锅，酸度计，50ml注射器，试管烧杯等。药品，海藻酸钠，明胶磷酸-柠檬酸缓冲液。DNS溶液，氯化钙，戊二醛，生理盐水，HClNaOH方法和步骤（1）取原酶液15ml与150ml的3%的海藻酸钠溶液混合搅拌。（2）加入150ml3%明胶溶液搅拌混匀。（3）用6号注射器针头以3-5cm高度用力均匀向

3、下注入到1%的氯化钙溶液中，立刻形成光滑的小球。冰箱放置30min（4）抽滤滤出小球，置于30℃5%的戊二醛中，硬化1h。当微球达到一定硬度后，用生理盐水反复洗涤，洗后的固定化酶冰箱保存。（5）取微球4-5粒按测定原酶液的方法测量其最适温度，最适ph温度稳定性，及ph稳定性。Iph值对酶活力的影响，实验数据绘图如下ph对酶活力影响-0.200.20.40.60.811.22.53.54.55.56.57.58.59.510.5原酶固定化酶Ⅱph值稳定性试验实验数据绘图如下ph稳定性试验-0.0200.020.040.060.080.10.120.142.53.5

4、4.55.56.57.58.59.510.5原酶固定化酶Ⅲ温度对酶活力的影响实验数据绘图如下00.10.20.30.40.50.60.7203040506070原酶固定化酶Ⅳ温度稳定性试验温度对酶活力的稳定性影响00.050.10.150.20.250.30.350.40.450.5203040506070原酶固定化酶分析：由于固定化酶是将木聚糖酶首先包埋于海藻酸钠中，然后用戊二醛进行固定，这样就可以得到比较稳定的固定化酶，由上面的ph对酶活力影响的曲线可以看出，原酶的酶活力受ph影响比较大，而固定化酶比较稳定，受ph影响较小，但是固定化酶的活力有所下降。主要是

5、由于包埋法将物质固定，阻止了固定化酶的动力学行为发生变化以及活力降低。从温度对酶活力及稳定性来看，原酶的稳定性不及固定化酶，而且固定化酶的适应ph范围较广，由此现在的工业生产一般都用固定化酶，从而产生较大的效益。