pBI121表达载体及其转化植株的快速鉴定

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1、浙江大学学报(农业与生命科学版)34(2):137～142,2008JournalofZhejiangUniversity(Agric1&LifeSci1)文章编号:100829209(2008)0220137206pBI121表达载体及其转化植株的快速鉴定王华新,曹家树,向珣,余小林,叶纨芝(浙江大学蔬菜科学研究所,农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室,浙江杭州310029)摘要:以双元质粒pBI121为基础分别构建正义、反义和RNA干涉(RNAi)植物表达载体.根据pBI121质粒多克隆位点两侧的DNA序列设计1对

2、通用引物,以表达载体的重组质粒DNA为模板进行PCR扩增,使用限制性内切酶BamHⅠ酶切PCR产物以验证扩增条带的真实性,从而可以快速鉴定pBI121表达载体的重组克隆.这种方法也可用于快速鉴定上述表达载体的转基因植株,其检测结果与常规鉴定方法完全一致.此外,可以根据需要对表达载体的阳性PCR扩增产物进行测序,测序结果能够精确地显示出重组pBI121表达载体中目的片段的插入方向以及插入序列是否出现碱基突变.本研究为各种pBI121表达载体及其转基因植株的鉴定提供了一种快速、有效的方法.关键词:pBI121质粒;植物表达载体;转基

3、因植株;鉴定方法中图分类号:Q789文献标识码:AWANGHua2xin,CAOJia2shu,XIANGXun,YUXiao2lin,YEWan2zhi(KeyLaboratoryofHorticulturalPlantGrowthDevelopment&BiotechnologyofMinistryofAgriculture,InstituteofVegetableSecience,ZhejiangUniversity,Hangzhou310029,China)Rapidmethodtoidentifyexpressionv

4、ectorsandtansgenicplantsbasedonpBI121plasmid.JournalofZhejiangUniversity(Agric1&LifeSci1),2008,34(2):1372142Abstract:Toscreenrapidlypositiveclones,recombinantplantexpressionvectorsconstructedbasedonthebinaryvectorpBI121,containingsense,antisenseorRNAinterference(RNAi

5、)cassetterespectively,wereamplifiedbyPCRwithauniversalprimerpairdesignedaccordingtotheflanksequenceofmultipleclonesiteinpBI121,andPCRproductswithpredictedsizeswerefurtherverifiedbydigestionwiththerestrictionenzymeBamHⅠ.ThePCRamplification2digestionwithBamHⅠmethodwasu

6、sedforscreeningtransgenicplantscarryingtherecombinantpBI121expressionvector,anddetectingresultsofthemethodwereconsistentwiththetraditionalmeansforidentificationoftransgenicplants.Inaddition,PCRproductsamplifiedfrompositiveclonesharboringrecombinantexpressionvectorsma

7、ybesequencedtopreciselydemonstratewhetherinterestingfragmentswereinsertedintopBI121inarightorientationandwhethermutationexistedintheinsertedsequences.TheseresultsshowthatarapidandeffectivemethodtoidentifytheexpressionvectorsandtheirtransgenicplantscontainingpBI121pla

8、smidwasdeveloped.Keywords:pBI121plasmid;plantexpressionvectors;tansgenicplants;identificationmethod收稿日期:2006210230基金项目:国家自然科学基金资助项目