细胞骨架中间纤维破坏对体外软骨细胞代谢功能的影响

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1、中国药物与临床2011年7月第11卷第7期ChineseRemedies＆Clinics．July2011,Vo1．11,No．7·745·著·细胞骨架中间纤维破坏对体外软骨细胞代谢功能的影响王磊郭恒段王平卫小春【摘要】目的探讨破坏中间纤维对体外软骨细胞代谢功能的影响。方法2个月龄新西兰大白兔双膝关节全层软骨消化为原代软骨细胞，培养3d贴壁后，分为对照组和实验组，对照组用原代培养基继续培养，实验组在原代培养基中加入中间纤维破坏剂丙烯酰胺(终浓度为2．5mmol／L)。加药后第1、2天利用磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞早期凋亡率，第6天用细胞爬片苏木素一伊红(HE)染色观察细胞形

2、态的改变，第3、6、9天用实时定量聚合酶链反应法测定软骨细胞Ⅱ型胶原、糖胺多糖以及基质金属蛋白酶(MMP)一l3mRNA的表达量。结果实验组在加药后第2天软骨细胞的早期凋亡率高于对照组(P<0．05)；和对照组相比较，实验组在加药后第6天HE染色观察到细胞形态不规则，呈多角形，胞核深染且分裂像增多，细胞基质减少；在加药后第3、6、9天检测到实验组Ⅱ型胶原和糖胺多糖的mRNA表达相对于对照组下降(氏0．05)；在加药后第6、9天MMP一13mRNA表达显著增加(P<0．01)。结论中间纤维破坏后可以诱导软骨细胞的早期凋亡，致Ⅱ型胶原和糖胺多糖产生减少，而炎性因子MMP一13表达增

3、多，可能是骨关节炎产生的一个重要环节。【关键词】软骨细胞；胶原Ⅱ型；基质金属蛋白酶类；细胞骨架TheeffectofintermediatefilamentdestructionincytoskeletononmetabolicfunctionsofchondrocytesinvitroWANGLei,GUOHeng,DUANWang-ping,WEIXiao-chun．DepartmentofOrthopaedics．theSecondHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001，China【Abstract】Objectiv

4、eToinvestigatetheeffectofintermediatefilamentdestructiononmetabolicfunctionsofchondrocytesinvitro．MethodsFive2-montholdNewZealandwhiterabbitswereharvestedforfull-thicknesscarti—lagesofdoublekneejointundersterileconditions．Thefull—thicknesscartilageswerethendigestedintoprimarychon—drocytesins

5、equencebyusing0-4％pronaseand0．025％typelIcollagenandcultivatedfor3days．Afteradhesion．chondrocytesweredividedintocontrolandexperimentalgroupsandsuccessivelyculturedbyusingprimarymedium(90％DMEM／F12+IO％fetalcalfserum)，withtheexperimentalgroupadditionallyaddedintermediatefilamentdestruc-tiveagent

6、-acrylamide(finalconcentration：2．5mmol／L)．TheearlyapoptosisratewasdetectedbyannexinVat1and2daysafterdrugadministration，changeofcellmorphologyobservedbyHEstainingofcellclimbingsheetat6d，theex-pressionlevelsoftypelIcollagen，glyc0saminoglycansandMMP-13mRNAdeterminedbyrealtimePCRat3，6and9days．Re

7、sultsComparedwiththecontrolgroup，theexperimentalgrouphadanearlyapoptosisrateofchondrocytesat2dafterdrugadministration(P<0．05)，irregularpolygonalcellmorphology，deep-stainednucleus，relativelyin·creaseddivisionanddecreasedcellmatrixwiththeHEstainingat