木瓜蛋白酶活力的快速测定

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1、Detectio~n＆AIal'ysis蛋白酶活力的-I央速测定(珠海⋯市永隆⋯饮品有限公司，广东珠、黔＼摘要：介绍了一种经多次试验、操作简便、重复性好的木瓜蛋白酶活力的快速测定方法。关键词：木瓜蛋白酶；酶活；测定中图分类号：Q55文献标识码：B“酶清”是木瓜蛋白酶的新剂型，采用先进的O前言科学配方配制而成。选用酶稳定剂、抗氧化剂、缓冲剂，将木瓜蛋白酶制成液体状态，其活性稳蛋白酶的活力用分解出来的酪氨酸来表示。定，使用方便，可用于提高啤酒的非生物稳定性。目前国内通用的蛋白酶的活力单位定义为1mi

2、n水在后酵和清酒时加入，可以降解啤酒中的游离蛋解出1g酪氨酸的酶量称为1个单位。因此，在白质，防止啤酒在贮运和天气寒冷时产生浑浊和测定酶活力之前，先用福林酚试剂与已知的不同沉淀现象，延长了啤酒的保质期。浓度的酪氨酸反应，作出蓝色深浅程度(用0D值来木瓜蛋白酶是天然复合蛋白酶，通常，测定表示)与酪氨酸浓度关系的标准曲线，然后将酶和其酶活力时间长，操作复杂，且需要玛瑙研钵等底物反应的产物与福林酚试剂作用，在分光光度昂贵仪器。由于木瓜蛋白酶中的各种酶与酪蛋白计上读出光密度，再在标准曲线上推算出相当于作

3、用生成的产物是一致的，即酶催化蛋白质的肽多少g的酪氨酸，计算出酶活力单位。键水解，生成游离的氨基酸或多肽。因此可以利木瓜蛋白酶是从南方果王——番木瓜中提取用福林酚试剂与水解出来的酪氨酸作用，生成蓝的乳汁，经科学加工而制成的食品添加剂。木瓜色物质，通过分光光度比色法可以计算出酶活力蛋白酶具有很高的蛋白分解活性，已广泛用于啤的大，J、。酒酿造、肉类加工、动植物蛋白水解制品、饼干、果酱、果汁加工和果酒的生产上。特别是在啤酒1材料和方法工业上，木瓜蛋白酶可作为澄清剂，将啤酒中游离的蛋白质分解为易溶于水的

4、短肽、氨基酸，既1．1材料8丰富了营养成分，又防止啤酒在贮运过程中产生1．1．1木瓜蛋白酶卑浑浊与沉淀，延长了啤酒的保存期；另外，在麦市场购买。芽糖化阶段加入木瓜蛋白酶，可弥补麦芽中蛋白1．1．2试剂和仪器第酶活力不足的缺陷，提高氨基氮的浓度，保证发1．1．2．1仪器恒温水浴锅、721型分光光度计、12卷酵的正常进行，确保产品具有良好风味；在肉制试管20支、大试管6支、吸管lml13支、2ml2品加工方面，木瓜蛋白酶可作为肉类的嫩化剂(如嫩支、5ml3支、1Oral1支。第肉粉)、分解剂(能够将

5、固体肉完全水解为容易消化1．1．2．2试剂10吸收的肉汁，例如鸡精、兔精、鳖精制造等)等。(1)福林酚试剂期【收稿日期】200％一09一-03【作者简介】季-：32~，男，1994年汕头大学生物系应用生物化学专业毕业，学士学位，北京理工大学MBA在读。食品工程工程师，质量工程师。现任珠海市永隆饮品有限公司品质管理部部长；参与研发的“健德康螺旋藻系列食品”获得“广东省优秀新产品二等奖”和“广东省科学技术进步三等奖”，个人获得“广东省江门市科学技术进步三等奖”。Detection＆Analysis称

6、取钨酸钠(Na2wo4·2H20)25g、钼酸钠Na2MnO4·2H20)25g放入2000m1圆底烧瓶中，加入175ml蒸馏水，再加入50ml85％的磷酸及100ml浓盐酸。装好回流冷凝管(接口处包有铝薄或玻璃纸的软木塞)，加热到沸腾，然后用／1、火保持缓和的沸腾状态，回流10h，回流结束后加入150g硫酸锂Li2SO4和50ml水，并在沸腾(不必装冷凝管)时立即加入几滴溴液(应趁热加溴，否则没有充分作用就挥发完了)，待作用数分钟后再煮沸15min，以除去过量的溴。加溴的作用是除掉溶液中的绿色

7、。如果溶液仍呈绿色，可再加入几滴溴液，再煮沸除去将不同浓度酪氨酸溶液吸取lml于6支试管多余的溴直至试剂呈黄色。冷却后稀释至1000ml中。按表3次序逐个加入试剂，并混合均匀，然(原液)，过滤，贮于棕色瓶，f临用前将此原液加后置于40~C恒温水浴中保温20rain，在721型分光入2倍蒸馏水稀释而成。光度计上读取光密度(取680nm)。(2)标准酪氨酸溶液表3不同浓度酪氨酸溶液对应光密度表称取100mg酪氨酸(预先在105℃烘箱内烘至·匣重)，以0．2NHC1溶解后定容到100ml，再用水稀释5

8、倍，即得到2001,zg／L的酪氨酸溶液。(3)酪蛋白溶液称取酪蛋白2g，置于100ml三角瓶中，加入0．2mol／LNazHPO61ml，置水浴上搅动使其溶解，然后倾出上清液(可能有少量蛋白质颗粒不能完全溶解)，加入39ml0．2mol／LNaH2PO，得到pH7．0的酪蛋白溶液，其余几种pH的酪蛋白液可照此法以表3酪氨酸浓度为横座标，光密度为纵座制备，pH5．8酪蛋白液用H3PO调节，pH8．5酪标，绘制酪氨酸标准曲线。蛋白液可全部用Na2HPO配制，再用NaOH调节1．2．2蛋白酶活力测定