实验三十一 种子生活力的快速测定

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1、实验七种子生活力的快速测定一、氯化三苯基四氮唑法（TTC法）[原理]凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚无此反应。当TTC溶液深入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH3或NADPH2）还原时，可产生红色的三苯基甲曁（TTF），胚便染成红色。当种胚的生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化则不明显，故可由染色的程度推知种子生活力的强弱。[仪器与试剂]培养皿2套，镊子1靶；单面刀片1片；垫板（切种子用）1块；烧杯1个；综合试剂瓶；取1gTTC溶于1dm3蒸馏水或冷开

2、水中，配成0.1%的TTC溶液。药液pH应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后在加水）。[方法]1．将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。2．随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。3．把切好的种子分别放在培养皿内，加TTC溶液，以浸没种子为度。4．放入30～50℃的恒温箱内保温30min。也可在20℃左右的温室下放置40～60min。5．保温后，倾出药液，用自来水冲洗种子2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生

3、活力，办判断结果记入表内。染色法测定种子生活力记载表项目方法种子名称供试粒数有生活力的种子粒数无生活力的种子粒数又生活力的种子站供试粒数的%[注意事项]31．TTC溶液最好现配现用。如需要贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。2．染色温度一般为25～35℃为宜。3．判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根虽有小部分坏死，但其它部位完好。4．判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失技能的组织超

4、过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚叶轴的连接处或在培根上有较重的坏死部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。5．对于不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。现将主要作物种子生活力测定所要去的条件列举如下：TTC法测定主要作物种子生活力要点作物种子准备TTC浓度(%)在35℃下染色时间（h）水稻高梁、玉米及麦类作物棉花、荞麦、蓖麻花生、甜菜、大麻、向日葵大豆、菜豆、亚麻、三叶草去壳纵切纵切剥去种皮剥去种皮无须准备0．10．10．10．10．12～30.5～12～33～43～4一、红墨水（酸性大红G

5、）染色法有生活力的种子其细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，某些染料如红墨水中的酸性大红G不能进入细胞内，胚部不染色。而丧失活力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料可进入细胞内使胚部染色。所以可根据中子胚部是否染色来判断种子的生活力。[仪器与试剂]用具与TTC法相同。红墨水溶液的配制取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）作为染色剂。3[方法]1．先将待测种子用水浸泡3～4h，待充分吸胀后取出一部分新种子，在沸水中煮沸3～5min，作为死种子。2．取浸好的新种子，陈种子和死种子50粒，如为小麦和

6、玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵切成两半，其中一半用于测定。3．将备好的种子分别放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。4．染色10～20min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子，直到所染颜色不再洗出来为止。5．对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。凡胚部部着色或略带浅红色者，即为具有生活力的种子，若胚不染成胚乳相同的红色，则为死种子。把测定结果记入表内（同TTC法）。[思考题]TTC法和红墨水测定种子生活力有何不同？参考文献[1]中国科学眼北京植物研究所植物园种子站.北京市种子站编.小麦种子生活力的测定——红四氮唑染

7、色法简介.北京人民出版社.1978年[2]D·F格雷勃编.农业种子红四氮唑测定手册.农业出版社.1979年[3]山东农学院、西北农学院编.植物生理学实验指导.山东科学技术出版社.1980年3