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《毕赤酵母表达巴曲酶发酵条件的优化研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、蛇志JournalofSNAKE(Science&NAtureareKEytohealth)2009年第21卷第2期Vol.21No.2,2009毕赤酵母表达巴曲酶发酵条件的优化研究1,22**222薛雁,徐梅,薛百忠,王宏英,兰海英(11吉林大学,吉林长春130012;21辽宁诺康生物制药有限责任公司,辽宁沈阳110171)[摘要]目的对表达重组巴曲酶的巴斯德毕赤酵母的发酵条件进行优化,确定最佳的发酵控制条件以获得重组巴曲酶的最高表达量。方法通过多因素正交实验确定巴曲酶发酵培养的最适培养条件。结果表达温度在25e,pH值为710,加入甲醇的量为10g/L时为最优发
2、酵条件,诱导表达时间为84~96h。结论重组巴曲酶可以开发为止血药,代替临床应用的从蛇毒中提取的巴曲酶。[关键词]重组巴曲酶;毕赤酵母;摇瓶发酵;发酵优化[中图分类号]R97713[文献标识码]A[文章编号]1001-5639(2009)02-0094-05StudiesonBatroxobinFermentationConditionsoftheEngineeredPichiaPastorisStrain1,22**222XUEYan,XUMei,XUEBai2zhong,WANGHong2ying,LANHai2ying(11JilinUniversity,Ch
3、angchun,Jilin,130012,China;21LiaoningNuokangBio2pharmaceuticalCo.,LTD,Shenyang,Liaoning,110171,China)Abstract:ObjectiveInordertoprovidetheoreticalbasisfortheindustrialproductionofba2troxobin.thebatroxobinfermentationconditionsofthegeneticengineeredPichiapastorisstrainKM71H/pPICZAA2Bgin
4、shake2flaskwerestudied.MethodsTheoptimumconditionsareselectedbyorthogonaldesign.ResultsTheoptimumtemperatureis25e,pHis710.metha2nolconcentrationis10g/L,timeis84~96h.theactivityofbatroxobinwasreachedto30Ku/ml.ConclusionRecombinantbatroxobincanbedevelopingashaemostattotaketheplaceofclini
5、cappliedbatroxobinpurifiedfromsnakevenom.Keywords:recombinantbatroxobin;Pichiapastori;shake2flaskfermentation;optimization巴曲酶(BatroxobinEC3.4.21.29)是1963年酶在毕赤酵母中进行表达,表达量达到31431NIH/[3]奥地利学者VonKlobusitzky首次从巴西矛头蝮蛇ml,从每升发酵液中可纯化得到710mg。李招发(Bothropsatrox)毒液中分离得到的一种丝氨酸蛋等于2007年也报道了将巴曲酶在毕赤酵母中进
6、行白水解酶(类凝血酶)。它作用于哺乳动物血浆中纤表达,表达量达到22Bu/ml,从每升发酵液中可纯[4]维蛋白原A链中的Arg162Gly17间的肽键,释放出化得到1010mg。目前还没有对重组巴曲酶发酵纤维蛋白肽A,从而快速地将血液中的纤维蛋白原条件进行优化研究的详细报道。本研究对表达巴曲转变为纤维蛋白,这些纤维蛋白就能聚集成疏松的酶的毕赤酵母KM71H/pPICZAA2Bg进行摇瓶发酵栓子来封闭伤口,实现快速止血的效果。同时,在体条件的研究,为发酵罐大规模表达奠定基础。内它并不激活凝血因子Ý,由其水解产生的纤维蛋1材料与方法白凝块的侧链不能交联,易被纤维蛋白溶酶
7、降解,所111菌种PichiapastorisKM71H及质粒[1,2]以不会造成血液系统的栓塞。目前,临床应用pPICZAA菌株购自Invitrogen公司。表达重组巴的立止血和巴曲亭是从巴西矛头蝮蛇蛇毒中分离纯曲酶的工程菌KM71H/pPICZAA2Bg为本实验室构化的天然巴曲酶。建。韩国的YouWeon2Kyoo于2004年报道了巴曲112培养基**:通讯作者。94蛇志JournalofSNAKE(Science&NAtureareKEytohealth)2009年第21卷第2期Vol.21No.2,200911211种子培养基YEPD固体培养基(每升含上
