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《成年大鼠心肌细胞的分离和培养技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、徐州医学院学报 ACTAACADEMIAEMEDICINAEXUZHOU2005,25(5)·393·X成年大鼠心肌细胞的分离和培养技术1212王 影,孙 红,范乐明,周 峰(1.南京医科大学动脉粥样硬化研究中心,江苏南京210029;2.徐州医学院生理学教研室,江苏徐州221002) 摘要:目的 建立稳定的成年大鼠心肌细胞分离和培养方法,以便进行成年大鼠心肌细胞收缩功能的研究。方法 将成年大鼠心脏挂于Langendorff装置上灌流,胶原酶消化分离成年大鼠心肌,无血清悬浮培养心肌细胞。6光镜观察,结合形
2、态学和收缩功能评价心肌细胞。结果 新分离的心肌细胞的收获量为(4～6)×10个,杆状和圆形,其中长杆状细胞大于75%,横纹清晰,收缩幅度(12.00±2.68)%。无血清培养24h后,细胞保持完整的形态结构,长杆状心肌细胞占总数的70%以上,收缩幅度(11.78±1.59)%,与刚培养时的细胞相比,无显著差别(P>0105)。结论 通过本方法可以对成年大鼠心肌细胞进行良好的分离培养。关键词:心肌细胞;细胞分离;细胞培养;大鼠+中图分类号:Q813.11文献标识码:A文章编号:1000-2065(2005)0
3、5-0393-04IsolationandcultureofadultratcardiomyocytesWANGYing,SUNHong,FANLe-ming,etal(AtherosclerosisReserchCenter,NanjingMedicalUniversity,Nanjing,Jiangsu210029,China)Abstract:ObjectiveTobuildastablemethodforisolationandcultureofadultratcardiomyocytes.Meth
4、odsTheiso2latedadultratheartwasmountedontotheLangendorffapparatueforperfusionandhallogenasedigestion.Thetreatedheartwasprocessedtogetthesuspensionofsinglecardiomyocytesforcultureinserum-freeDMEMmedium.Themorphologyandcont2ractilefunctionofthecardiomyocytes
5、werestudiedunderopticalmicroscopetocomparethefreshandculturedcardiomyocytes.6ResultsThetotaloffreshlyisolatedadultratcardiomyocyteswas(4-6)×10andmorethan75%ofthemwererod-shapedcellswithclearcross-striations.Theamplitudeofunloadedshorteninginfreshcardiomyoc
6、yteswas(12.00±2.68)%.Inthe24hcardiomyocyteculture,therod-shapedcellsaccountedformorethan70%andtheiramplitudeofunloadedshorteningwas(11.78±1.59)%.Nodifferenceswerenoticedbetweenthefreshlyisolatedcellsandtheculturedones(P>0.05).Conclu2sionAdultratventricular
7、cardiomycytescanbewellisolatedandculturedbyusingthestatedmethod.Keywords:cardiomyocytes;cellisolation;cellculture;rat 随着科学技术的进步和心脏研究的不断发展,为此我们在总结国内外实验室分离培养成熟心肌细单个心肌细胞已成为研究心脏结构、代谢、功能、病胞的基础上摸索出一套比较简单、易行、经济、有效理生理及其机制的重要工具,特别是近年来,心肌细的分离培养方法,并进行了形态学和收缩功能的研胞电生理
8、和分子生物学研究及心肌中功能相关基因究。研究的兴起,使得成熟心肌细胞被越来越多地应用1 材料和方法于心血管病理生理的研究。但成熟心肌细胞分离和培养的技术、条件要求较高,使得成熟心肌细胞的分1.1 实验动物 成年SD大鼠,雌雄不拘,体重200离培养成功率极低。以往普遍采用的离体灌流分离～250g,由徐州医学院实验动物中心提供。成年大鼠心肌细胞,分离技术复杂,细胞产量与质量1.2 药品和试剂 胶原酶Ⅱ型(Gibco公
