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《人参_银杏叶提取物对A_1_40_省略_导的大鼠原代神经元凋亡的保护作用_丛伟红》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第36卷第7期Vol136,Issue72011年4月Apri,l2011人参、银杏叶提取物对AB1-40诱导的大鼠原代神经元凋亡的保护作用*丛伟红,生立嵩,李杨,李澎,林成仁,刘建勋(中国中医科学院西苑医院实验中心,北京100091)[摘要]目的:观察B-淀粉样蛋白(AB)对原代神经元的损伤以及人参、银杏叶提取物(extractsofginsengandginkgo1-401-40biloba,EGGB)的保护作用。方法:以AB1-40诱导大鼠原代神经元建立AB毒性损伤细胞模型,结合AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术、
2、MTT比色法、透射电镜及Westernblot法,确定AB1-40的造模浓度与时间,检测EGGB对原代神经元细胞增殖活性、-1凋亡率、超微结构和细胞caspase-3蛋白表达的影响。结果:1Lmol#LAB1-40作用24h可诱导原代神经元凋亡率显著升高-1-1(P<0101);EGGB(5,50mg#L)可明显增强细胞增殖活性(P<0105);EGGB(50mg#L)可明显抑制神经元凋亡、改善细胞超微结构、抑制caspase-3的过度表达(P<0105,P<0101)。结论:AB可明显诱导体外培养的原代神经元凋亡,EGGB则1-40
3、有较好的神经保护作用,可有效抑制神经元凋亡,这种作用可能是与其改善神经元及亚细胞器结构、提高细胞增殖活性、抑制caspase-3的过度表达等有关。[关键词]人参、银杏叶提取物;B-淀粉样蛋白;原代神经元;凋亡B-淀粉样蛋白(B-amyloidpeptide,AB)是老年证号SCXK(京)2007-0001。斑的核心成分,在阿尔茨海默病(Alzheimercsdis-112药物与试剂EGGB由神威药业科技股份有ease,AD)的发生、发展过程中起关键作用。体外实限公司惠赠(批号090914),DMSO溶解后存于4验证实,AB的多种片段(
4、25-35,1-40,1-42)均对神e,使用前加入维持培养基稀释(DMEM-F12培养[1-2]-1经元具有诱导凋亡和细胞毒性作用。本实验所液,5%胎牛血清,5%马血清,013g#L谷氨酰用的人参、银杏叶提取物(extractsofginsengandgin-胺)。AB1-40、阿糖胞苷、多聚-L-赖氨酸氢溴化物、四ko,EGGB)中,人参皂苷Rg1为1141%,人参皂苷甲基偶氮唑蓝(MTT),购自Sigma公司(AB1-40以Rb1为3136%,银杏黄酮醇苷为9138%,银杏内酯DMEM-F12溶解、分装,-80e保存,用前37e
5、孵A为1193%。前期研究证实,EGGB可改善多种育48h);DMEM-F12培养基、胎牛血清、马血清、记忆障碍、痴呆模型动物的学习记忆能力,并对其014%TritonX-100,购自Gibco公司;DMSO、胰蛋白[3-4]机制进行了初步探讨。本实验以凝聚态AB1-40酶,购自Amresco公司;谷氨酰胺购自北京天来公诱导大鼠原代皮层及海马神经元建立拟AD细胞司;鼠抗NF单克隆抗体购自SantaCruz公司;兔抗模型,进一步探讨AB1-40对体外培养的原代神经元大鼠caspase-3一抗购自美国CST公司;羊抗兔的毒性作用以及EGG
6、B对AB1-40诱导的神经元损HRP-IgG二抗购自北京博奥森公司;山羊封闭血清、伤的保护作用,为人参、银杏叶提取物治疗AD提FITC标记IgG(H+L)抗体购自北京拜尔迪公司;供实验依据。AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒(批号9211223)购1材料自上海炎彬化工科技有限公司;其余试剂均为国产111动物SD大鼠乳鼠,出生24h之内,雌雄兼分析纯。用,北京维通利华实验动物技术有限公司提供,合格113仪器与设备MC0175CO2培养箱(日本三洋公司);550-1575酶标仪(BIO-RAD公司);LSM510[稿件编号]2010
7、0809003META激光共聚焦显微镜(德国ZEISS公司);EP-[基金项目]国家自然科学基金项目(30701102,30830188);科技ICSELITE流式细胞仪(Beckman-Coulter公司)。部重大专项(2009ZX09301,2009ZX09303-003)*2方法[通信作者]刘建勋,研究员,Te:l(010)62835601,E-mai:lliu-jx0324@sina.com211大鼠原代神经元分离及培养取出生24h之#908#第36卷第7期Vol136,Issue72011年4月Apri,l2011内的SD大
8、鼠,在无菌条件下剪开头部皮肤、头骨,沿管壁加入215%戊二醛,4e静置1h。以PBS+取出全脑,置于加有肝素的无菌解剖液中洗净,分离蔗糖缓冲液冲洗3次。后固定等处理后,金刚刀超大脑皮层及海马,去除软脑膜,剪成小块(以上步
