一种改进的糖醛酸咔唑反应

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1、食品与药品FoodandDrug2010年第12卷第03期147·知识介绍·一种改进的糖醛酸咔唑反应BitterT,MuirHM[1,2]糖醛酸咔唑反应是测定色谱级分中糖醛酸的最温度可升至135℃。好方法。但此方法至少需要2h才能使生成的颜色相试管在沸水浴中加热10min，冷却至室温（为求对稳定，且某些化合物反应的颜色部分易被盐抑准确，建议先将试管冷却至－70℃，加入样品后，[3-5]制。生成的颜色不稳定，对过热或水的稀释敏振动时再升至室温）。[6][7-9]感，且易受试剂或样品中杂质的干扰。加入咔唑试剂0.2mL，振动混匀，沸水浴加[10]Gregor

2、y建立的测定氨基己糖的方法得到的结热15min后冷却至室温。测定530nm处的吸光度[11]论与Aminoff等相同，即硼酸根离子能使己糖的地（A），空白管与硫酸A之差应小于0.025。[12]衣酚-硫酸反应立刻显色，同样能增加糖醛酸-咔唑测定色谱级分时，为节约样品和试剂，建议比例反应的颜色。为样品0.5mL，硫酸试剂3.0mL，咔唑试剂0.1mL。本文改进的硼酸盐浓硫酸法反应快速、定量，3结果和讨论有以下优点：（1）比Gregory报道的方法更灵敏；颜色至少可稳定16h。除肝素外，葡糖醛酸内酯（2）立即显色；（3）颜色稳定性明显增加；（4）和大多数结缔

3、组织杂多糖反应灵敏度约是Dische原始重现性好；（5）减少氯化物和氧化剂干扰。此方法方法的2倍。Dische方法中，硫酸皮肤素（硫酸软骨[13]已有初步报道。素B）由艾杜糖醛酸产生的颜色较浅，是4-、6-硫酸[14]1试剂软骨素的41%。改进方法颜色产量可增至4-硫酸软（1）0.025mol/L十水合四硼酸钠（分析纯）的骨素的83%，见表1。硫酸（比重1.84，分析纯）溶液；（2）0.125%咔唑1μg/mL糖醛酸溶液可产生一定的颜色，但4μg/无水乙醇或甲醇溶液（分析纯），4℃避光可保存12mL以下重现性差。糖醛酸浓度4～40μg/mL时，A与周；（

4、3）葡糖醛酸内酯标准溶液4～40μg/mL，用糖醛酸浓度之间有线性关系。用葡糖醛酸内酯23苯甲酸饱和水溶液配制溶液，储藏备用，使用时用苯（αD+19.4°），终溶液中所有反应物在530nm处的1%甲酸饱和的蒸馏水或去离子水稀释即可。4℃可保存吸收系数为：E1cm=1160±3%。6个月。如将酸试剂加入样品，与上述操作未发现差别。2步骤硼酸离子浓度可在0.025～0.1mol/L，咔唑浓度可在将硫酸试剂5mL加入试管，在试管架上冷却至0.125%～0.5%之间。戊糖和色氨酸浓度高达100μg/mL4℃，将样品1mL或标准溶液1mL小心加入酸液层上时，也不会

5、产生颜色，但用0.125%咔唑、60μg/mL方，用毛玻璃或聚四氟乙烯塞密封试管，先轻轻摇动葡萄糖可产生相当于8μg/mL糖醛酸A。当被测样品试管架，后剧烈晃动，此过程中要一直保持冷却，混为聚合物时，需将酸液加热10min后再加入咔唑，经合物温度不能超过室温。如不遵守此注意事项，界面过以上处理或与咔唑同时加热25min，葡糖醛酸内酯[29]HeuerD,LipinskiAR,MachuyN,etal.Chlamydiacauseshighlyreducingiterativepolyketidesynthase[J].Science,2009,fragm

6、entationoftheGolgicompartmenttoensurereproduction[J].326(5952):589-592.Nature,2009,457(7230):731-735.[31]张汶婕，何晓冬，蒋企洲，等.低分子质量蚯蚓纤溶酶的获得[30]MaSM,LiJW-H,ChioJW,etal.Completereconstitutionofa及其活性研究[J].药物生物技术，2009，16（6）：550-553.148食品与药品FoodandDrug2010年第12卷第03期表1颜色产量对比多糖醛酸总量(μg/mL)A(Diac

7、he)A(Borate)A(Borate)/A(Dische)透明质酸（L.Light公司）1000.2740.5542.024-硫酸软骨素1000.2370.4762.04硫酸皮肤素1000.1060.3843.65硫酸乙酰肝素1000.3520.6141.74[15]Aortic硫酸乙酰肝素1000.3700.6121.65肝素（Hoffmann-La1000.3350.5331.59Roche）果胶500.3160.6322.00藻酸盐（L.Light公司）1000.1780.8694.88有相近的颜色产量。表2盐对咔唑反应颜色的抑制色谱样品中的灰

8、尘或水中氯的化合物等污染物多糖Dische/%Borate/%在氧化剂作用下产生