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1、2004年4月中国比较医学杂志April,2004第14卷 第2期CHINESEJOURNALOFCOMPARATIVEMEDICINEVol.14No.2研究报告hApoE7转基因小鼠纯合子的培育和鉴定12222张丽春,杨 鹏,蒋效松,薛越强,琦祖和(11首都医科大学宣武医院检验科,北京 100053;21基础医学研究所分子生物学国家重点实验室) 【摘要】 目的 载脂蛋白E(apoE)是血浆中参与脂质代谢的重要蛋白质,并且与迟发型早老性痴呆(AD)相关。为从整体水平研究人突变ApoE基因剂量与效应的关系,我们拟培育C57BLP
2、62hApoE7纯合子转基因小鼠。方法 将经Southern杂交鉴定为阳性的F1代小鼠进行互配,仔代经PCR初筛,再行Southern杂交鉴定,杂交结果经扫描定量分析以确定hApoE7基因整合的拷贝数,纯合子小鼠的拷贝数为杂合子的两倍。经此法鉴定的纯合子小鼠与正常C57BLP6小鼠进行侧交以进行进一步的鉴定。结果 Southern杂交鉴定出F1代转基因小鼠6只,F2代转基因小鼠7只,其中纯合子3只。将所得到的纯合子小鼠与正常的C57BLP6小鼠交配,仔代鼠经PCR鉴定结果全部为阳性。结论 通过培育C57BLP62hApoE7纯合子
3、转基因小鼠,发现人ApoE7基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传,转基因的遗传特征符合常染色体单位点整合。【关键词】 载脂蛋白E类;小鼠,转基因;纯合子+【中图分类号】Q343114 【文献标识码】A 【文章编号】167127856(2004)0220078203BreedingandIdentifyingoftheHomozygoushApoE7TransgenicMice12222ZHANGLi2chun,YANGPeng,JIANGXiao2song,XUEYue2qiang,QIZu2he(11BeijingXuanwuH
4、ospitalClinicalLaboratory,Beijing100053,China;21NationalKeyLaboratoryofMolecularBiology,InstituteofBasicMedicine)【Abstract】 ObjectiveApolipoproteinE(apoE)isanimportantserumproteinthatplaysaroleinlipidmetabolism.Moreover,apoE4hasbeenidentifiedasamajorriskfactorforAlzhe
5、imer’sdisease(AD).Inordertostudytherelationshipbe2tweenthegenedoseandeffectatthewholebodylevel,webredthehomozygoushApoE7transgenicmice.MethodsF1genera2tionoftheC57BLP62hApoE7transgenicmicewasmated,usingPCRmethodandSouthernblottotesttheoffspring.Theimageoftheblotwasdon
6、ewithlaserscanningtoidentifythecopynumberofhApoE7,thecopynumberofthehomozygoteshouldbeastwiceasheterozygote.Thenthosehomozygousmicewerecross2bredwithnormalC57BLP6micetotestfurther.Results6F1gen2erationand7F2generationtransgenicmiceincluding3homozygoteswereidentifiedby
7、Southernblot.Theoffspringofthecross2breedingofthehomozygousmicewithnormalC57BLP6micewereallpositivebyPCRexamination.ConclusionThroughbreedingthehomozygoushApoE7transgenicmice,wefoundapoE7genecouldbeinheritedstablyinthetransgenicmiceandtheinheritancepatternofthetransge
8、newascompatiblewithasingleautosomalintegrationsite.【Keywords】ApolipoproteinE;Mice,transgenic;Homozygote 载脂蛋白E(apoE)是一种重要的血浆
