基于中药血清药物化学方法的逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础研究

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1、世界科学技术—中医药现代化★专题讨论：中药血清药物化学研究基于中药血清药物化学方法的逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础研究＊＊＊＊＊□张宁李会娟祁永华陈巧云王喜军（黑龙江中医药大学哈尔滨150040）摘要：目的：利用中药血清药物化学的方法，初步确定逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础及其作用机理。方法：通过建立逍遥散经口给药后大鼠血清色谱指纹图，确定大鼠血中移行成分的生药来源，并以血清色谱指纹图为指导，以血中移行成分来源生药为原料，定向富集制备逍遥散提取物；采用体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞株，以熊果苷为阳性对照药，用MTT法、多巴

2、氧化法、NaOH裂解法评价逍遥散提取物对细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响，探讨逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础及作用机理。结果：逍遥散经口给药后大鼠血中发现了14个入血成分，其中4个为血中原型成分，10个为原型入血或代谢产物，分别来自于柴胡、当归、白芍、甘草、茯苓。定向制备的逍遥散提取物对B16细胞酪氨酸酶活性和黑素合成有明显的抑制作用，作用强度呈浓度依赖性。结论：逍遥散的血中移行成分具有抑制B16细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的作用，是逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础。关键词：逍遥散血清药物化学B16细胞黄褐斑doi:10

3、.3969/j.issn.1674-3849.2010.04.032黄褐斑（Chloasma）是一种获得性色素沉着皮肤前中医药学及美容领域的一个研究热点。病，病程顽固，严重影响患者美观，给患者精神和生逍遥散具有疏肝解郁、调和气血之功用，是治活方面带来诸多烦恼和痛苦。中医认为黄褐斑多因疗肝郁脾虚的常用方剂，且在临床上广泛应用于黄肝郁脾虚所致的脏腑气血失调所致。虽然中西医治褐斑的治疗，但实验研究基础薄弱。本研究拟利用[1]疗黄褐斑的药物和手段比较多，但或因疗效过于缓中药血清药物化学的方法，从逍遥散体内直接作慢、或因不良反应太多

4、，一直未有一种疗效显著、安用物质出发，在细胞水平上直接阐明逍遥散治疗黄全、公认、令医患都满意的治疗方案。因此，寻找组褐斑的药效物质基础。方合理、高效安全的中药美白祛斑制剂，已成为目一、实验材料收稿日期：2010-06-121.仪器修回日期：2010-07-28＊黑龙江省科技厅青年科学基金（QC08C11）：基于中药血清药物化学的逍遥散治疗黄褐斑的有效成分及作用机理研究，负责人：张宁；黑龙江省教育厅青年学术骨干教师资助计划（1154G15）：基于中药血清药物化学的逍遥散治疗黄褐斑的有效成分及作用机理研究，负责人：张宁。＊＊联

5、系人：张宁，副教授，主要研究方向：中药药效物质基础及体内代谢研究，Tel：0454-6050350，E-mail:zhang-ning2006@hotmail.com；王喜军，本刊编委，教授，博士生导师，黑龙江中医药大学副校长，Tel:0451-82110818，E-mail:xijunw@sina.com。〔WorldScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica〕6432010第十二卷第四期★Vol.12No.

6、4-1Agilent1200seriesLC-MS液质联用仪（G1322A柱温：35℃；流速：1.0mL·min；检测波长：280nm；流Degasser，G1311AQuatPump，G1329AALS，G1316A动相：乙腈-0.2%磷酸水，梯度见表1。TCC，G1315DDAD）；VenusilXBPC18（4.6mm×250mm，4.逍遥散提取物药液5μm；天津博纳艾杰尔科技有限公司）；BT224S万分以柴胡、当归、白芍、甘草、茯苓为原料，以逍遥之一电子天平（赛多利斯）；TGL-16G-C高速台式冷散血清色谱指纹图

7、为指导，经60%乙醇提取和AB-8冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；HF-90CO2培养大孔吸附树脂定向富集，得到逍遥散提取物，收率为箱（上海智城分析仪器有限公司）；MK3型酶标仪（热4.73%，经口给药后与逍遥散产生相同的血中移行成电上海仪器有限公司）；小容量恒温培养振荡器（上分，结果见图1。称取逍遥散提取物0.8g，用100mL-1海智城分析仪器有限公司）；BCM-10004型超净工作DMEM溶解配制成8mg·mL，用HCl和NaOH调pH台（苏净集团安泰公司）。值为7.0，过0.22μm微孔滤膜，4℃保存。给药时用2.

8、药品与试剂DMEM培养液稀释至所需的药物浓度。甘草苷（南京泽朗医药科技有限公司）；柴胡、当5.逍遥散提取物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖的[2]归、白芍、白术、茯苓、薄荷、煨姜、甘草饮片均购自北影响京同仁堂制药集团哈尔滨药店，以上药材均经黑龙选择对数生长期的细胞，用0.25%胰酶消化，调3江中医药大学佳木斯