基于中药血清药物化学方法的防己黄芪汤药效物质基础研究

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1、中图分类号论文编号学科分类号密级ｒ舰ＳｈａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ硕士学位论文基于中药血清药物化学方法的防己黄芪汤药效物质基础研究－ｓＴＣＭＳｅｒｕｍＰｈａｒｍａｃｏｃｈｅｍｉｓｔｒＢａｓｅｄＡｎａｌｉｓｏｆｔｈｅｙｙＥｆｆｅｃｔｉｖｅＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＦａｎｇｊｉｈｕａｎｇｑｉＴａｎｇ研究生姓名：魏珊导师姓名：张淑蓉教授、职称学科：中药学、专业名称研究方向：中药质量控制及活性成分分析研究申请学位类型：科学学位

2、二〇—ｋ年三月十五曰山西中医学院2017届硕士学位论文山西中医学院学位I论文原创性声明山西中医学院2017届硕士学位论文中文摘要目的本实验以经方防己黄芪汤为研究对象，通过比较防己黄芪汤水提取物及其不同萃取部位和不同浓度乙醇提取物的抗炎镇痛作用，确定防己黄芪汤供试液的制备方法；建立防己黄芪汤全方与单味药材的HPLC-DAD指纹图谱，确定全方主要的化学成分及其药味归属；建立防己黄芪汤含药血清全方和单味药的HPLC-DAD指纹图谱，初步阐明防己黄芪汤血清中各成分的来源；通过UPLC-MS检测防己黄芪汤全方的化学成分及血清药物化学成分，

3、确定防己黄芪汤的血液移行成分，初步阐明其抗风湿作用的药效物质基础。方法1.本实验分别采用水和20%、50%、75%、95%乙醇作为提取溶媒，并将水提取物用不同有机溶媒萃取得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇不同部位，比较其抗炎镇痛作用。以大鼠足肿胀度作为抗炎评定指标，热板法和醋酸扭体法规定时间内活动次数作为镇痛评定指标，采用SPSS19.0软件包进行统计分析，确定防己黄芪汤供试液的制备方法。2.采用高效液相色谱法，通过对流动相、检测波长、柱温等因素考察，建立防己黄芪汤全方及单味药的HPLC指纹图谱，确定共有峰的个数，利用国家药典委颁布的《中

4、药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)》的“相关系数”法和“夹角余弦”法计算指纹图谱的相似度，对精密度、稳定性、重复性进行方法学考察，通过全方及单味药指纹图谱的比对，初步确定防己黄芪汤全方中的化学成分并对其进行药味归属。3.通过对血清样品的制备方法，血清处理方法、采血时间和天数的考察，确定出血清的处理方法为：SD大鼠，灌胃给药4.2g/mL（2mL/100g），连续灌胃三天，每天2次，最后一次灌胃1h后腹主动脉取血，离心得血清。加入3倍量乙腈沉淀蛋白，取上清液用氮吹仪吹干溶剂，再用流动相复溶。建立防己黄芪汤血清中全方和单味

5、药的HPLC指纹图谱，利用所建立的指纹图谱对大鼠含药血清进行入血成分分析。比较提取液、空白血清、含药血清的HPLC色谱图，初步确定全方中的化学成分并对其进行药味归属。4.利用UPLC-MS技术对防己黄芪汤进行血清药物化学研究，分别提取m/z在282-284、416-418、580-625的正离子、m/z在313-345、430-487、609-619、623-624、I山西中医学院2017届硕士学位论文845-850、983-985的负离子，找出其中的血液移行成分以及代谢产物，阐明防己黄芪汤的入血成分及其抗风湿的药效物质基础。结果1

6、.抗炎实验显示：75%、95%乙醇提取物对大鼠致炎30min后足肿胀度效果抑制作用更好。镇痛实验显示：水提取物、50%和75%乙醇提取物对热板所致小鼠舔足反应最好，水提取物和75%乙醇提取物对醋酸诱发的小鼠的扭体反应略好。综上所述：75%乙醇提取物效果最好。2.建立了防己黄芪汤全方和单味药提取液的HPLC-DAD指纹图谱，确定了28个共有峰，利用“相关系数法”和“夹角余弦法”计算指纹图谱的相似度，结果均大于0.90，并对共有峰进行了归属，5、6、7(毛蕊异黄酮葡萄糖苷)、10、12、14(.芒柄花素葡萄糖苷)、17(毛蕊异黄酮)、1

7、8、21(芒柄花素)、24号峰来源于黄芪，2、8、9(甘草苷)、11、13、15(异甘草苷)、16(甘草素)、19、20、22、23(甘草酸)号峰来源于甘草，25、27(防己诺林碱)、28(粉防己碱)号峰来源于防己。1、3、4、26未找见其归属，可能为新产生成分。白术单味药材的指纹图谱色谱峰峰形较好，防己黄芪汤全方提取物的指纹图谱色谱峰不明显。3.建立了防己黄芪汤含药血清全方和单味药的HPLC-DAD指纹图谱，检测到防己黄芪汤指纹图谱中19个共有峰，其中1、2、5、6(毛蕊异黄酮葡萄糖苷)、9号峰来源于空白血清，7、8、10、12、

8、13号峰来源于黄芪，3、4、14、15号峰来源于甘草，17、18（防己诺林碱）、19（粉防己碱）号峰来源于防己，11、16在单味药材血清中未见，可能为代谢产物。4.利用UPLC-MS技术对防己黄芪汤进行血清药物化学研究。到目前为止，检