毛细管液相色谱

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1、第*&卷分析化学（9T-UCVW8UWT）!研究报告第&期!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!&##%年&月NG?LIKIX.;EL=:.Y8L=:PZ?F=:NGIA?KZEP"%$4"(&分子印迹毛细管整体柱液相色谱法测定咖啡因#颜流水!王宗花!罗国安!王义明（清华大学化学系，北京"###$%）摘!要!建立了一种新型高选择性分离测定咖啡因的微柱液相色谱法。在该方法中，以咖啡因为模板分子，经紫外光引发原位聚合制备了分子印迹毛细管整体柱。考察了柱制备过程中影响柱性能的主要因素，优化了色谱

2、分离条件。结果显示所制备的分子印迹整体柱对咖啡因具有高度选择性，咖啡因与其结构相似物的最高分离度为&’()。将这一方法用于测定绿茶饮料、百事可乐和复方药片中咖啡因含量，获得满意结果。关键词!毛细管整体柱，分子印迹聚合物，咖啡因，微柱高效液相色谱!"引""言咖啡因是一种嘌呤类生物碱，它能促进血液流通，扩张血管，并且有利尿、兴奋中枢神经等功能。咖啡因的含量是可可类食品、饮料、茶叶以及许多药物中含有的一个重要品质指标。由于除含咖啡因成分外，待分析对象中还含有其结构相似化合物或多种添加剂等成分。这些成分都可

3、能影响咖啡因含量的准确测定。因此，分析工作者一直期望建立一种简便、高选择性的测定方法。我国0123",*%%+"//,中规定饮料中咖啡因含量的测定方法是紫外分光光谱法和高效液相色谱法。紫外分光光谱法需要繁琐的氯仿萃取，常规的高效液相色谱法需要价格昂贵的填充色谱柱和消耗大量的流动相，污染环境。分子印迹聚合物因其具有预定的选择性和良好的稳定性，已作为一类新型色谱柱填料、固相萃取剂和传［"4%］感膜材料。然而，为了避免繁琐的填充过程和因填充不均匀引起的色谱峰展宽等问题，近年来免填充的分子印迹整体柱及其与微

4、分离方法（包括微柱液相色谱、毛细管电泳、毛细管电色谱和芯片分离［(4$］等）的结合已引起人们极大兴趣和关注。目前的研究还大多集中在柱制备和分离可行性方面探索，用于实际样品分离分析的研究还少见报道。本文在前期工作基础上用低温（5"(6）光引发在毛细管内原位聚合制备高选择性咖啡因印迹毛细管整体柱，并将该毛细管色谱柱用于分离测定饮料及药片中咖啡因，获得满意结果。#"实验部分#’!"试剂甲基丙烯酸（788）、甲基丙烯酸!+三甲氧基硅烷丙基酯及咖啡因（9:;<=公司）；茶碱、可可碱以及"，)+二甲基黄嘌呤（>

5、?@A=公司）；三甲氧基丙烷三甲基丙烯酸酯（3BC7，8:DE?FG公司产品）；乙腈（色谱纯）；甲苯（分析纯），经金属钠干燥后重蒸。其余试剂均为分析纯。HIJK?F.:=（北京百事可乐饮料有限公司），康师傅绿茶（0EIIL3I=7EM.L，青岛顶益食品有限公司）均从市场购得。复方对乙酰氨基酚片（8HN）为北京小西天中西药品分装厂产品。#’#"印迹柱制备毛细管柱按文献［/］方法制得。将印迹分子咖啡因、偶氮二异丁腈（8C1-）、甲基丙烯酸（788）和三甲氧基丙烷三甲基丙烯酸酯（3BC7）溶于含"#O异辛

6、烷的甲苯溶液。将混合物置于冰浴中，氮气脱气后，小心地将其注入紫外透明的熔硅毛细管（)("A?’D’；H.:PA?FE.3IFGL.:.@?IK，HG.IL?Q，8R）内，两端套紧塑料塞，5"(6下*,(LA紫外灯光照聚合/#A?L。然后，将该柱连在高压泵上用乙腈+醋酸（体积比$S&）冲洗去除多余的反应混合物和印迹分子。不含印迹分子的对照毛细管柱按同样方法制得。毛细管柱进样前须经流动相平衡至获得稳定的基线信号。&##*+#*+"#收稿；&##*+#,+&(接受本文系国家自然科学基金重大项目（-.’&#

7、&//#*#+,）资助第1期颜流水等：分子印迹毛细管整体柱液相色谱法测定咖啡因EE’#=!!"#样品的制备饮料样品经超声脱气后，用"!#$!%滤膜过滤；称取药片$片，求出平均片重。研细后精密称取约#""%&细粉，溶于’""%(的’)#（!"!）甲醇*水中，超声并经"!#$!%滤膜过滤后使用。!!$#毛细管液相色谱毛细管液相色谱在微型毛细管电色谱系统（美国+,-./0*1"""23，45-%-6,7+/685797&-/.公司）上完成。系统由:;.67<4*=>"微型智能液相色谱泵、3?@?@AB""

8、$C型进样阀、49D,;379D高压电源、波长连续可调的ML0/,BK;5343*1"紫外T可见检测器和自动控制工作站$个模块构成。该系统采用模块化设计，可灵活组合以完成毛细管电色谱、毛细管电泳和［’"，’’］毛细管液相色谱N种模式的分离分析。毛细管液相色谱的工作流程见图’。两种流动相以微型液相色谱泵作为压力驱动系统，在混合器中高压混合，经特殊设计分流器分流后流入进样阀；样品由进样器抽取送入进样阀，在流动相的带动下流入毛细管色谱柱。样品在柱内分离，最后在紫外检测器端进