EZH2 mRNA在骨肉瘤中的表达及意义

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1、EZH2mRNA在骨肉瘤中的表达及意义吴晓春杨春雷王建军钟正明吴建华湖北省武汉市黄陂区人民医院骨2科（430300）【摘要】目的探讨EZH2mRNA骨肉瘤的异常表达与骨肉瘤发生发展的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测50例骨肉瘤组织中EZH2mRNA的表达情况，并对结果进行统计学分析。结果EZH2mRNA在骨肉瘤组织及正常骨组织中的表达分别为66.0%和6.7%，差异有统计学意义(P<0.05)；EZH2mRNA在骨肉瘤组织中的阳性表达率与病理分级有关（P<0.05），而与性别、年龄及病理类型无关（P>0.05）。结论EZH2mRNA参与了骨肉瘤的发生与发展，

2、EZH2mRNA可能成为骨肉瘤一个潜在的基因治疗靶点。【关键词】骨肉瘤；EZH2mRNA；基因表达骨肉瘤是最常见的原发于骨组织的成骨性恶性肿瘤，尤以青少年高发，其恶性程度高，且对放化疗敏感性低，易复发和转移，预后较差[1]。目前临床上对骨肉瘤诊断及治疗上尚无特殊有效指标及方法。EZH2作为一种果蝇zeste基因增强子的人类同源物，在多种肿瘤中呈高表达状态，具有促进细胞增殖及肿瘤细胞的扩散的恶性表型[2,3]。目前EZH2在骨肉瘤中的相关研究鲜有报道，故本研究采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨肉瘤组织中EZH2mRNA的表达情况，旨在探讨其与骨肉瘤的相关性，为其基因治疗

3、提供参考依据。1资料与方法1.1一般资料所有病例均为我院骨科2005年12月~2010年12月期间手术切除的骨肉瘤标本50例，均经临床、影像学及病理切片证实，且术前均未行放疗及化疗。其中男31例，女19例；年龄19~58岁，平均（24.5±5.6）岁。按Enneking外科分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期26例，Ⅲ期15例；按Dahlin病理分型：骨母细胞型27例，纤维母细胞型6例，软骨母细胞型13例，其它型4例。同时取30例经病理证实的骨肉瘤旁骨组织作为对照，其中男17例，女13例；年龄21~56岁，平均（22.7±5.8）岁。所有样品取出后均于-80℃冰箱中冻存。1.2方法取100mg骨

4、肉瘤组织，使用Trizol试剂（美国InvitrogenLifetechnologies公司），采用Trizol一步法提取总mRNA。采用RT-RNA方法，以β-actin为内参，在同一体系中加入EZH2与β-acttin两种引物进行扩增。其中EZH2(332bp)，上游引物：5’-CTCCCGCTGAGGATGGATAC-3’，下游引物：5’-GG-CTCCACAAGTAAGACAGAGGTC-3’，β-actin(202bp)，上游引物：5’-GGCGG-CACCACCATG-3’，下游引物：5’-AGGGGCCGGACTCGT-3’。取3μLRNA逆转录成cDNA，取其2μ

5、L产物进行PCR扩增。PCR扩增体系为25μL，反应条件：94℃预变性5min，94℃变性45s，58.6℃退火30s，72℃延伸1min，共30个循环，最后72℃延伸10min。取PCR产物8μL置于2%琼脂糖凝胶中（含溴化乙锭0.5μg/ml），以120V电压电泳30min，在紫外线下可见相应长度的目的基因及内参照的扩增条带。1.3统计学方法采用SAS8.2软件进行统计分析，计数资料比较采用χ2检验或精确Fisher概率法，P<0.05视为有统计学意义。2结果2.1EZH2在骨肉瘤及正常骨组织中的表达骨肉瘤标本与正常骨组织中EZH2mRNA表达阳性率分别为66.0%(33/5

6、0)，6.7%(2/30)，两者比较差异有统计学意义（χ2=26.82，P<0.05）。内参照β-actin在骨肉瘤组织的表达强度与正常骨组织基本一致。见图1。EZH2mRNA在4例骨母细胞型骨肉瘤组织的表达均为阳性，在4例正常骨组织中的均无表达图1EZH2在骨肉瘤及正常骨组织中的表达2.2EZH2mRNA在骨肉瘤中的表达与病理特征的关系不同性别、年龄及病理类型的骨肉瘤组织中，EZH2mRNA的表达差异无统计学意义（P>0.05），而其在不同病理分期中的表达差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。表1EZH2mRNA在骨肉瘤中的表达与病理特征的关系项目例数阳性例数阳性率（%）χ

7、2P性别0.14>0.05男性311858.1女性191052.6年龄0.03>0.05<5013753.9≥50372156.8病理类型>0.05*骨母细胞型271663.0软骨细胞型13653.9纤维母细胞型6466.7其它型4250.0病理分期6.03<0.05Ⅰ期9222.2Ⅱ期261557.7Ⅲ期151173.3合计502856.0注：*精确Fisher概率法3讨论骨肉瘤是起源于间叶组织的高度血管化的骨原发性恶性肿瘤，其主要特征是可产生骨样组织的梭形基质细胞。研究显示，