重组毕赤酵母工程菌产木聚糖酶酶学性质的研究

《重组毕赤酵母工程菌产木聚糖酶酶学性质的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、2009年第45卷第3期AnimalProduction·动物生产重组毕赤酵母工程菌产木聚糖酶酶学性质的研究李富伟，汪勇!，汤海鸥（挑战生物技术有限公司，北京100081）摘要：采用DNS还原糖法研究基因工程菌毕赤酵母产木聚糖酶的酶学性质。结果表明：该木聚糖酶具有良好的热稳定性；最适pH为4.5，在pH3.5~7.0条件下均能保持较高的酶学活性，且对不同酸碱pH环境具有较强的耐受性；内源性蛋白酶对该木聚糖酶的活性影响较小；室温25℃下贮存12个月，该酶活性保持在80%左右；在4.0%仔猪预混料中贮存12周，酶活存留仍

2、达91.4%以上，表现出良好的贮存稳定性。关键词：毕赤酵母；木聚糖酶；酶学性质中图分类号：S816.79文献标识码：B文章编号：0258-7033（2009）03-0043-03木聚糖是由!-!-1,4-木糖苷键连接起来并含电子天平、精密pH计、恒温摇床、碘量瓶（100mL）、有多种取代基的戊聚糖，是植物细胞壁半纤维素的可控恒温水浴锅、722分光光度计、微量移液器。重要组分[1]。由于单胃动物消化道内不能分泌用于1.3酶活测定降解木聚糖的酶类，故难以将其消化利用；同时木聚1.3.1酶活单位定义在37℃、pH5.5条件

3、下，1min糖本身具有较强的抗营养特性，限制了禾谷类饲料从1.0%燕麦木聚糖中释放1!mol木糖所需的酶量原料（如小麦、黑麦、大麦等）在饲料工业和畜牧业即为1个活性单位（U）。生产中的应用。当前众多研究表明，添加木聚糖酶1.3.2酶活检测方法DNS还原糖法。能有效地消除饲粮中木聚糖的抗营养作用，改善饲"试验设计料养分的消化利用率，提高动物生产性能，降低饲料成本[2]。此外，木聚糖酶的开发利用在拓宽非常规饲2.1热稳定性研究料资源的应用范围，缓解能量饲料资源的匮乏等方2.1.1干热稳定性将木聚糖酶在不同温度下的面也有积

4、极的意义。恒温烘箱中分别干热处理1min或3min，测定其剩本文研究了基因工程菌毕赤酵母所产木聚糖酶余酶活。以未处理酶样品的活力为100%，其余经过的酶学性质，并从酶的热稳定性、酸碱耐受性、蛋白处理的酶活力与之相比得到的百分比即为该酶的相酶耐受性及贮存稳定性等几个方面来评估预测木聚对剩余酶活。糖酶的饲用效价，从而为饲用木聚糖酶的选择与应相对剩余酶活(%)=(处理前酶活值/处理后酶用提供可靠的数据参考，避免单纯依据标识的酶活活值)×100值来选择、应用木聚糖酶产品带来的不必要损失。2.1.2湿热稳定性准确移取3mL缓冲

5、液于100mL容量瓶中，将其浸没在不同温度的水浴锅中，预热!材料与方法5min，再准确称取2.50g木聚糖酶倒入容量瓶（其1.1样品木聚糖酶（10000U/g，北京挑战生物技含水量约54.55%），摇匀，湿热处理3min，测定其剩术有限公司提供）、4.0%仔猪预混料（市场采集）。余酶活，并计算在不同处理条件下木聚糖酶的相对1.2仪器与试剂胃蛋白酶（P-7000）、胰酶剩余酶活。（P-7545）、燕麦木聚糖均购于Sigma公司，其余试剂2.2对酸碱耐受性研究均为分析纯。2.2.1最适pH在不同pH下分别测定木聚糖酶，—

6、—————————————以其最高酶活值对应的pH为最适pH。其他pH下收稿日期：2008-10-07；修回日期：2008-11-05作者简介：李富伟（1974-），男，博士测定的酶活值与最适pH对应酶活值的百分比定为*通讯作者该pH下相对酶活。相对酶活(%)=[其他pH对应的43动物生产·AnimalProduction2009年第45卷第3期酶活值/最适pH对应的酶活值]×100湿热处理对木聚糖酶活性的影响大于干热处理，其2.2.2酸碱耐受性称取0.40g左右木聚糖酶于相对剩余酶活为68.93%。100mL碘量瓶

7、中，加入pH为3.0（或4.5、6.2、7.0）表%湿热处理!&'(对木聚糖酶活性的影响!的缓冲液20mL，置于25℃恒温摇床中（250R），在."&'0"20、40、60min后调回pH至5.5并测定其剩余酶活，""#"$"%"()*+,-&&+$-&"+"%%#+,&#%+&-计算在不同处理条件下木聚糖酶相对剩余酶活。2.3对蛋白酶耐受性的研究3.2木聚糖酶对酸碱的耐受性2.3.1对胃蛋白酶的耐受性移取0.2mol/LpH3.2.1最适pH由图1可知，该木聚糖酶在pH3.0或4.5的胃蛋白酶（1mg/mL）-乙酸

8、缓冲液20mL4.5处有最大酶活值，其最适pH为4.5；在pH于100mL碘量瓶中，37℃预热5min，称取0.50g左3.5~6.5，其酶活性较为稳定，相对酶活均在80%以右木聚糖酶于碘量瓶中，摇匀并准确计时30、60min上，表明该酶具有较宽的pH适应性。此外，pH在后立即测定其剩余酶活，计算在不同处理条件下木3.5~6.5时，酸碱pH的改