犬瘟热RT-POR快速诊断方法的建立

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1、中国动物检疫2009年第26卷第3期一38一犬瘟热RT-POR快速诊断方法的建立熊炜，王：权，李健，，邱璐，蒋静’，李春阳’，黄忠荣，胡永强’(1．上海出入境检验检疫局，上海200135；2．中国农业科学院上海兽医研究所，上海200232)摘要：本研究建立了快速诊断犬瘟热感染的RT—PCR方法，并应用该方法对犬瘟热病死犬的脏器及感染犬体表采集样品进行了检测。为确定犬瘟热最佳的隔离检疫周期及采样部位，本研究对一例CDV攻毒犬感染病程收集的口鼻液、粪便、尿液样品进行了对比检测，结果证实粪便、口鼻液等易于获取的样

2、品中CDV病毒滴度较高，并可在发病全程检测到，因此，它们可作为理想的受试样品。关键词：犬瘟热；犬瘟热病毒；RT—PCR；犬病中图分类号：S852．659．5文献标识码：A文章编号：1005—944X(2009)03—0038—03EstablighmentofRT-PCRmethodforrapiddetectionofcauinedistemr~rXiongWei，WangQuan~，LiJian，QiuLu，JiangJing，LiChun-yang，HuangZhong-rong，HuYong-qia

3、ng(1．ShanghaiEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Shanghai200135，China；2．ShanghaiInstituteofVet—efinary，ChineseAcademyofAgricnlturalSciences，Shanghai200232，China)Ab

4、岫：I—PCRmethodwasestablishedforrapiddetectionofcaninedistemper．Usingthismethod，CDVpos—iti

5、vesamplescollectedfromdiferentsitesandfecessamplescollectedfromCDVinoculatedpuppyweredetected．ToconfirmthebestseperationperiodandSamplingsites，apuppywasinoculatedanditsbodyfluidfromdiffer—enttimewasdetectedbytheRT．I’CRmethod．Theresultsshowedthatthefeces．na

6、salmucusandsalivawithhighvirustitercallbeservedasthebestsamplingsites．K'砌I：caninedistempervirus；RT—PCR；caninediesease由犬瘟热病毒(Caninedistemper分离、病理包涵体检查、血清学检测、犬的体液(泪液、鼻液、唾液、血液)、粪virus，CDV)引起的犬瘟热(Canin~核酸探针、原位杂交等方法外．RT—便、尿液，及病死犬的心、肝、脾、肺、disteroper。CD)．是一种犬的高度接

7、触PCR方法是目前检测CDV最常用的肾、肠等组织器官。本研究使用的其他性、急性传染病ⅢCDV的宿主范围广方法[5-8]为满足口岸对进出境宠物隔犬病毒，如犬细小病毒(Caninepar．泛，自然宿主为犬科动物(Tt、狼、豺、离检疫的需要．本研究建立了RT—vovirus，CPV)、犬冠状病毒(Canine狐等)，鼬科动物f貂、臭鼬、黄鼠狼等)，PCR快速诊断犬瘟热感染的方法．并coronavirus，ccv)、犬传染性肝炎病浣熊科动物(浣熊、小熊猫、大熊猫应用该方法对犬瘟热病死犬的脏器毒(Infectious

8、caninehepatitisvirus．等)．还可感染灵长类动物(如日本称及感染犬体表采集样品进行了检测ICHV)．为本室从病犬组织中分离保猴等)．甚至有CDV感染人的病例本为确定犬瘟热最佳的隔离检疫周期存并制备成DNA或cDNA备用将待病一年四季均可发生．以寒冷季节多及采样部位．本研究对一例CDV攻检组织或粪便样品用适量生理盐水研发，其传染性强。发病率高．临床症状毒犬感染病程收集的口鼻液、粪便、磨制备成匀浆液备用多样，容易继发其他细菌、病毒的混合尿液样品进行了对比检测．结果证实1．3犬瘟热病毒攻毒试验感

9、染和二次感染，常引起大批犬、貂、粪便、口鼻液等易于获取的样品中将犬瘟热病死犬的肝脏匀浆液狐等动物发病．死亡率达30—80％．雪CDV病毒滴度较高．并可在发病全程混入食物中．喂饲1头4月龄的健康貂高达100％本病呈高度接触性传检测到．因此。它们可作为获取高质小犬．该犬于接毒2天后开始出现典染，患犬为主要传染源，患犬的鼻液、量病毒样品的采样部位型的犬瘟热临床症状．病程持续3周唾液、泪液、呼吸道飞沫、组织器官、血1材料