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《迟缓爱德华氏菌OppA蛋白的免疫原性及免疫保护分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、迟缓爱德华氏菌OppA蛋白的免疫原性及免疫保护分析1,21,21,211王妍妍,李贵阳,李杰,肖鹏,莫照兰(1．中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室,山东青岛266071;2．中国科学院研究生院,北京100049)摘要:迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)是水产养殖动物重要的病原菌,引起鱼类爱德华氏菌病,免疫防治是针对该病的一个有效途径。OppA是迟缓爱德华氏菌的一个寡肽透过酶组分,作者开展OppA的免疫原性及免疫保护性的研究,旨在评价其作为鱼类爱德华氏菌病疫苗候选抗原的可行性。将
2、致病性的迟缓爱德华氏菌LSE40的oppA克隆于表达载体pPROEXHTa,转化入大肠杆菌BL21(DE3),表达TM重组蛋白6His-OppA,并利用Ni-NTASefinosekit进行纯化。以纯化的6His-OppA两次注射免疫大菱鲆(Scophthalmusmaximus),第34天后检测血清抗体效价为1:1024;以LSE40对免疫的大菱鲆进行人工感染,测得免疫保护率是25.9%。结果表明,OppA可刺激大菱鲆产生免疫应答,并具有免疫保护效果。关键词:迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellata
3、rda);OppA;原核表达;免疫应答;免疫保护中图分类号:Q939.91文献标识码:A文章编号:1000-3096(2011)05-0019-05迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)是一种革兰德华氏菌病的良好的交叉保护性抗原。在前期工作氏阴性细菌,能引起水生动物发病,感染海水和淡中,本实验室从迟缓爱德华氏菌LSE40fosmid文库[27]水鱼类引起的疾病称为爱德华氏菌病克隆得到编码寡肽透过酶的opp基因簇。本研究(Edwardsiellosis),给养殖业带来重大经济损失[1-4]。通
4、过体外表达迟缓爱德华氏菌OppA,评价该蛋白在利用疫苗预防爱德华氏菌病的研究已取得一些进展,大菱鲆(Scophthalmusmaximus)中的免疫原性和免疫灭活菌体、细胞碎片、表面脂多糖等菌体成分具有保护效果。[5-7]良好的免疫原性,亚单位疫苗、减毒疫苗、DNA1材料与方法[8-14]疫苗显示了良好的免疫保护。由于迟缓爱德华氏菌存在血清型差异,导致一些疫苗的应用效果不稳1.1菌株、质粒、培养基定。筛选具有交叉保护作用的抗原是解决这个问题迟缓爱德华氏菌LSE40由本实验室从患病大菱[8]的一条有效途径。
5、鲆体内分离保存;克隆载体pEASY-T1(氨苄青霉细菌的寡肽透过酶(Oligopeptidepermease,简称素抗性)和大肠杆菌Trans-T1购自北京全式金生物技Opp)由OppABCDF5个蛋白构成,主要负责依赖术有限公司,表达载体pPROEXHTa(氨苄青霉素抗[15]ATP水解的寡肽营养摄取。革兰氏阴性菌的OppA性)来自Invitrogen公司;大肠杆菌BL21(DE3)购自作为底物结合蛋白,能结合多种形式的寡肽,为细天根生化科技(北京)有限公司;胰蛋白胨大豆肉汤[16]菌提供营养,还可作为
6、细胞膜受体,参与其他生培养基(液体TSB和固体TSA)用于培养迟缓爱德华[17][18]理过程的调控,如密度感应,孢子形成,抗生氏菌,LB培养基用于培养大肠杆菌;氨苄青霉素[19][20][21][22]素抗性,菌膜形成,细胞黏附,胞内寄生(Amp)的使用质量浓度为100mg/L。等。一些研究显示,同种细菌的OppA高度保守,作为抗原具有较好的免疫原性,能够不同程度地诱导收稿日期:2011-02-22;修回日期:2011-03-22宿主产生免疫应答,提高宿主针对相应病原的免疫基金项目:国家自然科学基金项目
7、(31072245);国家鲆鲽类产业技术保护力[23-26]。根据NCBI已公布的基因组序列信息,体系项目(NYCYTX-50);青岛市科技发展计划项目(08-1-7-2-HY)作者简介:王妍妍(1987-),女,山东济宁人,硕士,主要从事海洋微爱德华氏菌属的OppA氨基酸序列间相似度较高,生物与水产动物病害防治研究,E-mail:wyy8701@163.com;莫照兰,分布在92%～99%。因此,OppA可能是一个抵抗爱通信作者,电话:0532-82898561,E-mail:zhlmo@qdio.ac
8、.cnMarineSciences/Vol.35,No.5/201119TM1.2实验动物Sefinosekit(BIOBASICINC.)纯化目的蛋白。以SDS-PAGE检测纯化效果,以Bradford蛋白质定量大菱鲆购自山东青岛胶南养殖场,体长6～8cm,试剂盒(天根生化科技(北京)有限公司)测定纯化蛋白体质量15g左右,暂养于通气的水族箱,水温16～浓度。18℃,每隔两天换水和投喂饵料。实验前随机选取3尾鱼,取血清与迟缓
