大菱鲆Scophthalmusmaximus迟缓爱德华氏菌病免疫防控研究

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1、TheimmunestrategyinpreventionofedwardsiellasisinturbotBy【ChongWang】ADissertation／ThesisSubmittedtoUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofMasterofScience【InstituteofoceannolgychineseAcademyofScienceslApril，2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是在导师指导下进行

2、的研究工作及取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任人由本人承担。论文作者签名：日期：的陟s．∥学位论文版权使用授权书本人完全了解中国科学院海洋研究所有关保留、使用学位论文的规定，同意海洋研究所保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国科学院海洋研究所可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本学位论文。(保密论文在解

3、密后适用本授权书)学位论文作者签导师签字签字日期：p”．o“磐魄砂参、f，／-致谢首先感谢在硕士期间一直悉心指导我、教育我的导师孙黎老师，在这里请允许我向孙老师表达最大的谢意!在实验室工作学习这段时间里孙老师不辞辛苦，不厌其烦的指导我的实验工作，不仅培养了我实验操作的能力，独立思考的能力，更让我明白了科研道路到底是一条什么样的路，我们应该以什么样的态度去做科研。实验设计过程中，孙老师，创新严谨的思想成为了我学习的榜样，不断的激励着我向前进步。在这里我还要感谢一直在我身边支持我，鼓励我，帮助过我的老师张敏，胡永华，迟恒，孙铂光。师兄师姐周志侠，邱初，于兰萍，孙云，靳

4、仁娉，陈玲，汪玮，张宝存，张健，李墨非，龙昊，李永鑫，我的同门陈骋，贾盼盼，师弟张书仁，师妹张璐等。感谢各位师兄师姐在我实验遇到困难时能够在我的身边深切的给予指导。感谢同门，师弟师妹在实验过程中对我以帮助，你们的出现让我的实验室生活变得轻松，愉悦。感谢大家出现在我的生活当中，是你们的出现让我的人生变得不再单调，是你们带给了我生活的乐趣，让我在偶尔单调的实验生活中得到了些许的欢声笑语，谢谢各位。感谢舍友张帅，麻福斌在生活当中对我的关照。感谢开放室的各位老师对我开题、中期考核的指导与帮助。感谢研究生部屠国华书记，武伟主任，宋彩凤老师、迟杰老师、靳朝晖老师等各位老师在研

5、究生学习期间，给予了我莫大的帮助，对此我表示真挚的感谢。同时在这里我还要特别感谢在我生活当中一直以来支持我关心我的同学，李玉宏同学。感谢我的家人和朋友对我的关心支持与帮助。此外向在文中未提及的，帮助过我的同学和朋友们，一并致谢。摘要大菱鲆(Scophthalmusmaximus)迟缓爱德华氏菌病免疫防控研究迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)是海水养殖鱼类中的重要病原菌，其所导致的迟缓爱德华氏菌病(edwardsiellasis)每年给海水养殖业造成巨大的经济损失。针对迟缓爱德华氏菌病的频繁爆发，本论文尝试构建和筛选了两类疫苗分别为亚单位疫苗rFi

6、ma以及无毒株二价活疫苗P1V3来对迟缓爱德华氏菌病进行有效的预防及治疗。首先通过in．frame基因敲除技术构建了迟缓爱德华氏菌致病性菌株TX01的fmA缺失突变株TXfimA，与TX01相比，TXfimA在生物膜形成、侵染鱼类组织、吸附和侵入宿主外周血淋巴细胞等方面的能力均显著下降。以上实验结果表明，．声蒯是迟缓爱德华氏菌的一个重要毒力因子。为检测FimA的免疫原性，我们体外表达并纯化了重组FimA(rFimA)，将rFimA作为亚单位疫苗免疫大菱鲆。攻毒实验发现免疫后的大菱鲆能抵御迟缓爱德华氏菌的侵染(相对免疫保护率为70．2％)，这表明rFimA是一个具有

7、较高免疫保护效率的亚单位疫苗。此外我们发现rFimA对弧菌几乎没有免疫保护效应(相对免疫保护率为3．3％)，但它却能显著提高哈氏弧茵亚单位疫苗rVhhP2的免疫保护效应，这一现象表明rFimA同时具有佐剂的效应。综上所述，FimA是迟缓爱德华氏菌的一个重要毒力因子，rFimA具有佐剂的效应同时具有作为亚单位疫苗应用的潜力。为解决亚单位疫苗应用的局限性，本论文筛选了针对迟缓爱德华氏菌和弧菌的具有交叉保护效应的的浸泡疫苗和口服疫苗。首先从青岛附近海域中筛选到2种无毒株P1SW和V3SW，经16sRNA测序分析，P1SW和V3SW分别属于假单胞菌属和弧菌属，通过口服加浸

8、泡的方式制