胆固醇的测定

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1、中华人民共和国国家标准GB/T15206-94食品中胆固醇的测定方法 Methodfordeterminationofcholesterolinfoods ──────────────────────────────────── 1 主题内容与适用范围   本标准规定了用分光光度计测定各类动物性食品中胆固醇的方法。   本标准适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。2 原理   当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因此可先对食品样品进行提取和皂化，用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品胆固醇的含量。3 试剂   全部试剂除注明外均为分析纯，试验用水为蒸馏水。3.1 石油醚

2、。3.2 无水乙醇。3.3 浓硫酸。3.4 冰乙酸：优级纯。3.5 磷酸。3.6 胆固醇标准物质。3.7 胆固醇标准液。3.7.1胆固醇标准储备液（1mg/mL）：精确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，并定容至100mL。此液至少在2个月内保持稳定。3.7.2 胆固醇标准常备液（100(g/mL）：吸取胆固醇标准储备液10mL，用冰乙酸定容至100mL。此液用时临时配制。3.8铁钒显色剂。3.8.1铁钒储备液：溶液4.463g硫酸铁铵〔FeNH4(SO4)2·H2O〕于100mL85％磷酸中，贮于干燥器内，此液在室温中稳定。3.8.2 铁钒显色液：吸取铁钒储备液10mL，用浓硫酸定容至1

3、00mL。贮于干燥器内，以防吸水。3.9 50％氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。3.10  5％氯化钠溶液：称取5g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。3.11 钢瓶氮气：纯度99.99％。4 仪器和设备4.1 实验室常用设备。4.2 721型分光光度计。4.3 电热恒温水浴。4.4 电动振荡器。4.5 具玻塞试管：体积100ml、25mL。 5 操作步骤5.1 胆固醇标准线   吸取胆固醇标准常备液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL分别置于10mL试管内，在各管内加入冰乙酸使总体积皆达4mL。沿管壁加入2mL铁钒显色液，混匀，在15～90

4、min内，在560～575nm波长下比色。以胆固醇标准浓度为横坐标，吸光度之为纵坐标做标准曲线。5.2 样品测定5.2.1 食品脂肪的提取与测定   根据食品种类分别用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪。并计算出每100g食品中的脂肪含量。5.2.2 食品胆固醇的测定   将提取的油脂3～4滴（约含胆固醇300～500mg），置于25mL试管内，准确记录其重量。加入4mL无水乙醇，0.5mL50%氢氧化钾溶液，在65℃恒温水浴中皂化1h。皂化时每隔20～30min振荡一次使皂化完全。皂化完毕，取出试管，冷却。加入3mL5％氯化钠溶液，10mL石油醚，盖紧玻塞，在电动振荡器上振摇2

5、min，静置分层（一般约需1h以上）。   取上层石油醚液2mL，置于10mL具玻塞试管内，在65℃水浴中用氮气吹干，加入4mL冰乙酸，2mL铁钒显色液，混匀，放置15min后在560～575nm波长下比色，测得吸光度，在标准曲线上查出相应的胆固醇含量。6 结果计算             m×V×c            1        X＝────────×────             V1×m1            1000    式中：X—样品中胆固醇含量，mg/100g；         m—测得的吸光度值在胆固醇标准线上显示的胆固醇含量，mg；          V—石

6、油醚总体积，mL；        v1—取出的石油醚体积，mL；       m1—称取食品油脂样品量，g；          c—食品样品油脂含量，g/100g； 1/1000—折算成每100g食品中胆固醇毫克数。 7 平均允许误差   同一实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过平均值的10％。 8 标准曲线               0.60├                  │              0.50├                   │              0.40├                  │              0.30├      

7、            │             0.20├                  │              0.10├                                                       │                                                  0.00└────┴────┴────┴────┘