GB4789.6-1994 食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验.pdf

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1、GB4789.6—1994中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofdiarrheogenicEscherichiacoliGB4789.6—19941主题内容与适用范围本标准规定了食品中致泻大肠埃希氏菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中致泻大肠埃希氏菌的检验。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3．1平天：称取检样用。3．2均质器或乳钵。3．3温箱：36±1℃，42

2、℃。3．4水浴：100℃，65～68℃，50℃。3．5显微镜。3．6离心机。3．7酶标仪。3．8细菌浓度比浊管：MacFarland3号。3．9灭菌广口瓶：500mL。3．10灭菌三角烧瓶：500mL，250mL。3．11灭菌平皿：90mm×15mm。3．12灭菌试管：10mm×75mm。3．13灭菌吸管：1mL，5mL。3．14橡皮乳头。3．15载玻片。3．16酒精灯。3．17灭菌金属匙或玻璃棒。3．18接种棒，镍铬丝。3．19试管架，试管篓。3．20冰箱。3．21注射器0.25mL，连接内径为1mm塑料小管一段。3．22灭菌的刀子、剪子、

3、镊子。3．23小白鼠：1～4目龄。3．24硝酸纤维素滤膜150mm×50mmΦ0.45um。临用时切成两张，每张75mm×50mm，用铅笔划格，每格6mm×6mm，每行10格，分6行。灭菌备用。4培养基和试剂4．1乳糖胆盐发酵管：按GB4789.28中4.9规定。中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施.www.bzxzk.com.GB4789.6—19944．2营养肉汤：按GB4789.28中4.8规定。4．3肠道菌增菌肉汤：按GB4789.28中4.18规定。4．4麦康凯琼脂：按GB4789.28中4.24规定

4、。4．5伊红美蓝琼脂（EMB）：按GB4789.28中4.25规定。4．6三糖铁琼脂（TSI）：按GB4789.28中4.26,4.27规定。4．7克氏双糖铁琼脂（KI）：按GB4789.28中4.28,4.29规定。4．8糖发酵管（乳糖、鼠李糖、木糖和甘露醇）：按GB4789.28中3.2规定。4．9赖氨酸脱羧酶试验培养基：按GB4789.28中3.12规定。4．10尿素琼脂（pH7.2）；按GB4789.28中3.16规定。4．11氰化钾（KCN）培养基；按GB4789.28中3.16规定。4．12蛋白胨水、靛基质试剂：按GB4789.2

5、8中3,13规定。4．13半固体琼脂：按GB4789.28中4.30规定。4．14Honda氏产毒肉汤：按GB4789.28中4.34规定。4．15Elek氏培养基：按GB4789.28中4,35规定。4．16氧化酶试剂：按GB4789.28中3.18规定。4．17革兰氏染色液：按GB4789.28中2.2规定。4．18致病性大肠埃希氏菌诊断血清、侵袭性大肠埃希氏菌诊断血清、产肠毒素大肠埃希氏菌诊断血清、出血性大肠埃希氏菌诊断血清。4．19产肠毒素大肠埃希氏菌LT和ST酶标诊断试剂盒。4．20产肠毒素LT和ST大肠埃希菌标准菌株。4．21抗L

6、T抗毒素。4．22多粘菌素B纸片：300IU，φ16mm。4．230.1%硫柳汞溶液。4．242%伊文思蓝溶液。5检验程序致泻大肠埃希菌检验程序如下：中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施.www.bzxzk.com.GB4789.6—19946操作步骤6．1增菌样品采集后应尽快检验。除了易腐食品在检验之前应预冷藏外，一般不冷藏。以无菌手续称取检验25g，加在225mL营养肉汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂磨碎。取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN，其余的移入500mL广口瓶内，于36±1

7、℃培养6h。挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌肉汤内，于42℃培养18h。6．2分离将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板；污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板，于36±1℃培养18～24h，观察菌落。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。6．3生化试验6．3．1自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁琼脂（TSI）或克氏双糖铁琼脂（KI）。同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。以上培养物均

8、在36℃培养过液。6．3．2TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌。TSI底层不产酸，或H2S、KCN、尿素有任一项为阳性的培