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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第3期2011年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry356～360DOI:10.3724/SP.J.1096.2011.00356Ag/Au纳米粒子的没食子酸还原制备及其共振瑞利散射光谱测定人血清总蛋白王文星黄玉萍徐淑坤(东北大学理学院,沈阳110004)摘要以没食子酸为还原剂和稳定剂,用种子生长法制备出粒径均匀、单分散性和稳定性好、近球形的Ag/Au核壳纳米粒子。高分辨透射电镜(HRTEM)与X2射线能量色散光谱仪(EDX)测试表明,在Ag/Au摩尔比为1∶1.6时,Au已完全包裹在Ag
2、纳米粒子表面时,平均粒径为25nm。以此摩尔比制备的Ag/Au核壳纳米粒子为探针用共振瑞利散射光谱测定人血清总蛋白,在NaAc2HAc缓冲液(pH4.4)及0.05mol/LNaCl介质中,Ag/Au核壳纳米粒子与HSA形成稳定的复合物;Ag/Au2HSA纳米复合物的相对散射强度ΔI390nm与HSA浓度在010011～0.35mg/L范围内呈线性关系,其回归方程为ΔI390nm=-0.54+494.82c(r=019994),检出限为0.36g/L。本方法有较好的选择性,可用于人血清蛋白分析,结果与考马斯亮蓝G2250法一致,回收率在98.2%～102.3%之间,相对标准偏
3、差为2.3%。关键词Ag/Au核壳纳米粒子;没食子酸;共振瑞利散射光谱;人血清总蛋白1引言共振瑞利散射(RRS)作为共振非线性光散射,是具有高灵敏度和简易性的分析技术,因其灵敏度和[1]精密度高、干扰较少、操作简便等优点而备受关注。最早是以有机染料分子作探针测定核酸、蛋白[2][3][4][5]质、多糖、药物、无机分子等。近年来陆续出现以纳米粒子为探针测定药物和生物样品的报[6～10][11]道,由于Ag/Au核壳纳米粒子既保留了Au壳层良好的生物相容性和亲和力,同时Ag核又能[12,13]大幅度地提高表面增强拉曼散射和共振光散射等光检测信号,在生物分析检测方面具有明显优越[
4、14,15]性。Ag/Au核壳纳米粒子的制备主要采用以柠檬酸钠或盐酸羟胺作为还原剂的种子生长法。本研究以没食子酸为还原剂和稳定剂,用种子生长法在Ag晶种表面还原沉积Au,简单快速地制备出一系列含有不同Ag/Au摩尔比的Ag/Au核壳纳米粒子。本方法具有操作简便,组分比例可控,壳层包覆完全,粒径均匀、分散性和稳定性好等优点。将制备的Ag/Au摩尔比为1∶1.6的Ag/Au核壳纳米粒子作为探针用RRS技术测定人血清总蛋白,不仅探针不需修饰,操作简便,选择性和稳定性好,而且[16,17]比传统的染料法有更高的灵敏度,其检出限达到0.36g/L,可满足纳克级蛋白质检测的需要。2实验部
5、分2.1仪器与试剂LS255荧光分光光度计(PerkinElmer,USA),UV22100双光束紫外2可见分光光度计(北京瑞利公司),JEOL2010EX高分辨透射电镜(HRTEM,Japan,工作电压200kV)携带INCAX2sightX2射线能量色散光谱仪(EDX,England);PB221型pH酸度计(北京赛多利斯仪器系统有限公司);SZ293自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。考马斯亮蓝G2250(Amresco公司),人免疫球蛋白(IgG,北京博奥森生物技术有限公司),人血清白蛋白(HAS,Sigma公司)。HAuCl4、AgNO3和没食子酸等试剂均为分
6、析纯,购自国药集团化学试剂有限公司。人血清试样由东北大学医院提供。实验用水为三次蒸馏水。2.2Ag/Au核壳纳米粒子的制备与表征2.2.1Ag纳米粒子晶种的制备参照文献[18]制备银纳米粒子晶种:先将200mL三次蒸馏水置于-2三口瓶中,水浴加热至沸,磁力搅拌下依次加入1.0mL0.02mol/LAgNO3溶液,1.0mL2.7×10-4mol/L没食子酸溶液和100L2.4×10mol/LHAuCl4溶液,溶液很快由无色变为亮黄色,反应302010207215收稿;2010210208接受本文系国家自然科学基金(No.20870511)和中央高校基本科研业务费(No.N10
7、0405014)资助3E2mail∶xushukun46@126.com第3期Ag/Au纳米粒子的没食子酸还原制备及其共振瑞利散射光谱测定人血清总蛋白357min后自然冷却,制得Ag纳米粒子。室温避光保存,3个月内无沉淀,颜色未变化。2.2.2Ag/Au核壳纳米粒子的制备取2.2.1节制备的Ag晶种50mL,加入150mL水,水浴加热至沸腾,磁力剧烈搅拌,逐滴加入不同体积的24mmol/LHAuCl4及27mmol/L没食子酸溶液,制备了Ag/Au摩尔比分别为1∶0.05,1∶0.1,1∶0.2,1∶0
